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| 小分子G蛋白Rapl shRNA表达载体的构建和鉴定 | |
| 引用本文： | 郑霞,贺爱兰,叶启发,蒋圣军.小分子G蛋白Rapl shRNA表达载体的构建和鉴定[J].生命科学研究,2009,13(2). |
| 作者姓名： | 郑霞 贺爱兰 叶启发 蒋圣军 |
| 作者单位： | 1. 荆州市中心医院妇产科,中国湖北荆州,430043 2. 湖南人文科技学院生命科学系,中国湖南,娄底,417000 3. 中南大学湘雅三医院卫生部器官移植中心,中国湖南,长沙,410013 4. 北京市垂扬柳医院,北京市微刨医院,中国北京,100710 |
| 摘 要： | 应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术抑制Rapl基因的表达,构建Rap1 shRNA(small hairpin RNA,shRNA)表达载体,观察其对小鼠肝脏细胞中Rap1 mRNA和蛋白表达的干扰作用.根据小鼠Rap1 mRNA的全序列.设计了3种Rap1 siRNA序列(Rap1 siRNA1、Rap1 siRNA2、Rap1 siRNA3)和阴性对照序列(HK);采用克隆技术,将其插入带有报告基因绿色荧光(ECFP)的pGenesil-3栽体,构建Rap1 shRNA表达载体:经双酶切和测序证实Rap1 siRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致;昆明小鼠40只,体重18～20 g,随机分成4组: Ⅰ组(转染HK组)、Ⅱ组(转染Rapl shRNAl组)、Ⅲ组(转染Rap1 shRNA2组)、Ⅳ组(转染Rapl shRNA3组).于0、16、24 h腹腔内注射Rapl shRNA 2.0～2.5 mg/kg(用PBS稀释至1 mL);48 h后收集小鼠肝脏.用显微荧光、定量RT-PCT、免疫组化检测小鼠肝细胞中Rap1shRNA的转染率、Rap1基因表达以及蛋白质表达水平.Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组小鼠肝脏细胞体内转染率均大于60%,Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组的Rap1 mRNA表达、Rap1蛋白表达均降低,其中Rap1 shRNA1干扰效果最佳. |
| 关 键 词： | 小鼠肝细胞 |
Construction and Identification of shRNA Expression Vector Specific for Small GTPase Rap1 |
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| ZHENG Xia,HE Ai-lan,YE Qi-fa,JIANG Sheng-jun.Construction and Identification of shRNA Expression Vector Specific for Small GTPase Rap1[J].Life Science Research,2009,13(2). | |
| Authors: | ZHENG Xia HE Ai-lan YE Qi-fa JIANG Sheng-jun |
| Abstract: | |
| Keywords: | Rap1 siRNA shRNA |
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