| gcm蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 赵阳,彭佩莹,王静,周英,张义,唐超,任恋,彭夕洋,陈思行.gcm蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备[J].生命科学研究,2013,17(3):196-199. |
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| 作者姓名： | 赵阳 彭佩莹 王静 周英 张义 唐超 任恋 彭夕洋 陈思行 |
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| 作者单位： | 湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室心脏发育研究中心,中国湖南长沙,410081 |
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| 基金项目： | 湖南省普通高校学科带头人培养计划项目 |
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| 摘 要： | gcm(glial cells missing)是调控神经元细胞和神经胶质细胞相互转化的一个基因开关.在gcm功能缺损的突变体中,预期的神经胶质细胞发育成神经元细胞;而在gcm过表达的突变体中,预期的神经元细胞转化为神经胶质细胞.此外,gcm还调控血浆细胞发育.为了进一步研究gcm在发育中的功能,需要获得gcm蛋白并制备其抗体.根据已报道的gcm基因序列,以果蝇cDNA文库为模板进行PCR扩增得到gcm部分编码区序列,然后将其连接到pET-28a载体以获得原核表达载体.重组载体经酶切测序鉴定确认后,转化大肠杆菌(E.coli)BL21,并用IPTG诱导融合蛋白表达.采用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化蛋白,将纯化的His-gcm融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体效价.获得的gcm原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗gcm多克隆抗体,为gcm功能的进一步研究奠定了基础.
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| 关 键 词： | gcm 融合蛋白 多克隆抗体 |
Expression, Purification of gcm Fusion Protein and Preparation of its Polyclonal Antibody |
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| ZHAO Yang,PENG Pei-ying,WANG Jing,ZHOU Ying,ZHANG Yi,TANG Chao,REN Lian,PENG Xi-yang,CHEN Si-xing,LI Yong-qing,WU Xiu-shan.Expression, Purification of gcm Fusion Protein and Preparation of its Polyclonal Antibody[J].Life Science Research,2013,17(3):196-199. |
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| Authors: | ZHAO Yang PENG Pei-ying WANG Jing ZHOU Ying ZHANG Yi TANG Chao REN Lian PENG Xi-yang CHEN Si-xing LI Yong-qing WU Xiu-shan |
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| Institution: | (The Center for Heart Development,Key Lab of MOE for Development Biology and Protein Chemistry,Hunan Normal University,Changsha 410081,Hunan,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | gcm fusion protein polyclonal antibody |
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