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| 白斑综合症病毒实时荧光LAMP检测方法的建立及应用 | |
| 引用本文： | 李红梅,江晓,刘助红,赵哲,任春华,胡超群,石磊,王广军.白斑综合症病毒实时荧光LAMP检测方法的建立及应用[J].水生生物学报,2015,39(1):142-148. |
| 作者姓名： | 李红梅 江晓 刘助红 赵哲 任春华 胡超群 石磊 王广军 |
| 作者单位： | 1. 中国科学院南海海洋研究所, 热带海洋生物资源与生态重点实验室, 广州 510301; 2. 广州迪澳生物科技有限公司, 广州 510663; 3. 中国水产科学研究院珠江水产研究所, 广州 510380 |
| 基金项目： | 广东省中国科学院全面战略合作项目(2011B090300040);广东省鱼病防治专项资金项目资助 |
| 摘 要： | 研究利用ESE-Quant tube scanner检测平台,建立了一套基于环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)的实时荧光检测方法,用于白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的检测;并在此基础上,与巢式PCR、Real-time PCR和其他已发表的4种LAMP方法在检测灵敏度、实际应用方面进行比较。结果显示,研究建立的实时荧光LAMP检测方法在63℃恒温反应30min可检测到最低为105倍稀释的基因组DNA模板,与Real-time PCR检测方法的灵敏度相当,高于巢式PCR和其他已发表的4种LAMP方法的检测灵敏度;而且特异性较好,与传染性皮下及造血组织坏死病毒等5种常见对虾病原DNA均无交叉反应。通过构建质粒进一步进行灵敏度测试显示,本研究建立的实时荧光LAMP检测方法最低检测限度为24个拷贝质粒DNA,检出时间亦为30min。通过对66份待检样品的检测结果显示,实时荧光LAMP检测方法的检出阳性率为7.57%,准确率为100%,高于其他WSSV的检测方法。因此,研究建立的WSSV实时荧光LAMP检测方法,操作简单,反应速度快,特异性好,灵敏度高,成本低廉,可以直观、实时地观察反应的进行情况,适合对虾养殖现场及诊断实验室的WSSV快速检测。 |
| 关 键 词： | 白斑综合症病毒 实时荧光LAMP ESE-Quant tube scanner |
| 收稿时间： | 2013-09-24 |
Real-time fluorescence loop mediated isothernal amplification for the rapid detection of white spot syndrome virus |
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| LI Hong-Mei,JIANG Xiao,LIU Zhu-Hong,ZHAO Zhe,REN Chun-Hua,HU Chao-Qun,SHI Lei,WANG Guang-Jun.Real-time fluorescence loop mediated isothernal amplification for the rapid detection of white spot syndrome virus[J].Acta Hydrobiologica Sinica,2015,39(1):142-148. | |
| Authors: | LI Hong-Mei JIANG Xiao LIU Zhu-Hong ZHAO Zhe REN Chun-Hua HU Chao-Qun SHI Lei WANG Guang-Jun |
| Institution: | 1. Key Laboratory of Tropical Marine Bio-resources and Ecology, South China Sea Institute of Oceanology, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510301, China; 2. Guangzhou Deaou Biotechnology Co., LTD, Guangzhou 510663, China; 3. Pearl River Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Guangzhou 510380, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | White spot syndrome virus (WSSV) Real-time fluorescence loop mediated isothermal amplification (RealAmp) ESE-Quant tube scanner |
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