人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白在HeLa细胞中的表达及亚细胞定位

目的构建增强绿色荧光蛋白（EGFP）-人乳头瘤病毒16型变异株E7（HPV16-HBE7）重组质粒pEGFP-HBE7，研究HPV16-HBE7蛋白亚细胞定位，为进一步了解其生物学功能奠定基础。方法采用分子克隆技术，将HPV16-HBE7基因克隆在pEGFP—Cl表达载体上，用脂质体法导入宫颈癌细胞中；Western印迹检测HBE7蛋白的表达；同时借助免疫荧光技术和EGFP-融合蛋白技术，采用激光共聚焦显微镜观察HBE7蛋白的亚细胞定位。结果重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定，其目的片段大小、插入位点和核苷酸序列完全正确；结果表明，转染细胞HBE7蛋白的相对表达量其胞浆明显多于胞核；各个时间段HBE7蛋白均以胞浆分布为主，绿色荧光密集点状分布于细胞浆内，而野生株E7（WE7）蛋白分布在核内。结论人乳头瘤病毒16型变异株E7蛋白主要分布在细胞浆内，以胞浆为主的分布可能和HBE7基因发生突变后丢失核定位信号有关。