| 重组原核质粒GST-hTudor-SN-SN（1～4）的构建及表达 |
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| 引用本文： | 苏超,朱梦瑜,高星杰,王鑫廷,张桂敏,付晓,葛林,杨洁.重组原核质粒GST-hTudor-SN-SN（1～4）的构建及表达[J].国外医学：分子生物学分册,2010(6):483-487. |
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| 作者姓名： | 苏超 朱梦瑜 高星杰 王鑫廷 张桂敏 付晓 葛林 杨洁 |
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| 作者单位： | [1]国家教育部免疫微环境与疫病重点实验室,天津市300070 [2]天津市细胞与分子免疫学重点实验室,天津市300070 [3]天津医科大学基础医学研究中心,免疫学教研室天津市300070 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划资助项目（863计划） （No.2007AA02Z115）,国家自然科学基金（No.30670441,30970562,30670802,30811130394.30911130165,30970582）,天津巿科委国际合作项目（No.07JCZDJC07300）,国家自然科学基金重大研究计划项目（No.90919032）.国家教育部高等学校博士学科点专项科研基金（No.20091202110001,天津市教委重点项目（No.2008ZD01） |
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| 摘 要： | 目的 将人类Tudor-SN（tudor staphylococcal nuelease）蛋白SN（1～4）基因片段分别定向连入pGEX-4T-1质粒,使Tudor-SN蛋白sN各功能片段与（;＂蛋白在大肠埃希菌BL21细胞内融合表达.方法 以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的 基因,利用EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切法将目的 片段连接纠pGEX-4T-1载体卜,再将构建成功的GST-hTudor-SN-SN（1～4）重组质粒转化人大肠埃希菌BL-21内,IPTG诱导表达后再以考马斯亮蓝染色法检测GST融合蛋白的表达.结果 以单/双酶切和基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,考马斯亮监染色法观察到GST融合蛋白的正确表达.结论 重组原核GST.hTudor-SN-SN（1-4）质粒成功构建和表达.
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| 关 键 词： | 人类Tudor-SN蛋白 pGEX-4T-1 重组质粒 融合蛋白 |
Construction and Expression of GST-hTudor-SN-SN （1 |
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| Institution: | SU Chao(Key Laboratory of Tianjin, 300070, and Disease, Ministry of Education of China, Tianjin Key Laboratory of Cellular and Molecular Immunology, Tianjin, 300070, China Department of Immun, ology, Research Center of Basic Medical Science, Tianjin Medical University, Tianjin, 300070, China) |
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| Abstract: | Objective To construct prokaryote GST expressing recombinant plasmids, GST- hTudor-SN-SN （ 1 -4）, which contains SN （ （ 1 -4） fragments of human Tudor-SN. Methods The Tudor-SN tiagments were amplified by PCR from the recombinant pSG5-Tudor-SN-flag plasmid and inserted into GST expressiug vector pGEX-4T-1 at EcoR I and Sal I sites. The recombinant （;ST-hTudor-SN-SN （1 -4） plasmid were transformed into Escherichia coli BL-21 cells. The expression/ of GST fusion proteins was induced by IVTG and examined by Coomassie Brilliant Blue staining. Results The SN （1 -4） fragments of Tudor-SN were sequenced correctly and detected in the products of Ecoll I/Sa] I double restriction enzyme digestion. The GST fusion proteins wen abserved by Coomassie Brilliant Blue staining. Conclusion The recombinant prokaryote GST-hTudor-SN （1 - 4） plasmid was constructed successfully and expressed effectively. |
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| Keywords: | human Tudor-SN protein pGEX-4T-1 recombinant plasmid fusion protein |
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