家蝇幼虫抗菌肽Attacin基因的克隆表达及抑菌生物学活性

目的克隆家蝇幼虫Attacin抗菌肽基因．构建原核融合表达载体，建立Attacin体内抗菌活性检测系统，优化表达和纯化Attacin目的蛋白，并初步研究其抗菌生物学功能。方法以pUC m-T／Attacin重组质粒为模板，设计特异性引物，PCR扩增Attacin编码区序列，分别克隆至原核表达载体pET30a（＋）和pGEX-4T-1。构建原核重组质粒，转化大肠埃希菌，表达重组Attacin蛋白，并在大肠埃希菌中体内检测Attacin的抗菌活性。利用亲和层析柱纯化重组融合蛋白Attacin，SDS-PAGE进行纯度分析，琼脂糖平板抑菌试验鉴定其生物活性。结果pET30a（a＋）／Attacin和pGEX-4T—1／Attacin重组质粒分别转化大肠埃希菌后，以IPTG诱导表达，与未诱导对照相比，含有重组质粒的宿主菌生长受到抑制。从pET30a（＋）／Attacin重组质粒的表达宿主菌中未能获得His-Attacin融合蛋白，而从pGEX-4T—1／Attacin重组质粒转化菌种获得GST-Attacin融合蛋白。SDS-PAGE分析表明Attacin重组蛋白分子量与预期结果一致，琼脂糖平板抑菌试验显示重组Attacin具有抗菌活性。结论Attacin基因在原核系统中成功表达，并且纯化后具有抑菌活性，为下一步研究Attacin的生物学功能及其应用开发奠定了基础。