| 口蹄疫病毒3D蛋白在体外的表达纯化及二级结构分析 |
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| 引用本文： | 韩雪清,刘湘涛,林祥梅,尹双辉,尚佑军,刘健,梅林.口蹄疫病毒3D蛋白在体外的表达纯化及二级结构分析[J].微生物学杂志,2005,25(5):6-10. |
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| 作者姓名： | 韩雪清 刘湘涛 林祥梅 尹双辉 尚佑军 刘健 梅林 |
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| 作者单位： | 1. 中国检验检疫科学研究院,北京,100029
2. 中国农业科学院,兰州兽医研究所,贵州,兰州,730046 |
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| 基金项目： | 国家基础研究重大专项(2002BA711A12) |
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| 摘 要： | 口蹄疫(FMD)是严重影响全球农业经济的高度传染的毁灭性的疫病.3D蛋白是口蹄疫病毒(FMDV)编码的RNA聚合酶,参与病毒RNA的复制.利用PCR扩增得到了FMDV的3D基因片段,然后将其克隆到原核表达质粒pET-28a(+)上,构建重组表达质粒pETFM3D.转化宿主菌BL21(DE3)后,利用1 mmol/L的IPTG进行诱导表达.SDS-PAGE和Western boltting分析结果表明,得到了稳定、过量表达的可溶性的3D蛋白质.目的蛋白质经NI亲和层析柱一步纯化就达到95%,再经Q-sepharose柱纯化后达到97%.通过圆二(CD)色谱测定和计算3D蛋白质在不同的pH(2、4、6、8和10)和不同的温度下(25～85℃)的二级结构.上述结果表明,表达的可溶性3D蛋白质具有高表达、易纯化和稳定性好等特点.
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| 关 键 词： | 口蹄疫病毒 3D蛋白 表达纯化 CD分析 |
| 文章编号： | 1005-7021(2005)05-0006-05 |
| 修稿时间： | 2005年6月26日 |
Expression in vitro and Purification of Foot-and-Mouth Disease Virus 3D Protein and Its Secondary Structure Analysis |
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| HAN Xue-qing,LIU Xiang-tao,LIN Xiang-mei,YIN Shuang-hui,SHANG You-jun,LIU Jian,MEI Lin.Expression in vitro and Purification of Foot-and-Mouth Disease Virus 3D Protein and Its Secondary Structure Analysis[J].Journal of Microbiology,2005,25(5):6-10. |
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| Authors: | HAN Xue-qing LIU Xiang-tao LIN Xiang-mei YIN Shuang-hui SHANG You-jun LIU Jian MEI Lin |
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| Institution: | 1.Chinese Acad.of Inspect.& Quarant.Beijing 100029; 2.Lanzhou Inst.of Veterinary Med.Chinese Acad.of Agric.Sci.Lanzhou 730046 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | FMD virus 3D protein expression and purification circular dichroism analysis |
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