| 腾冲嗜热厌氧杆菌Cas2原核表达及生物信息学分析 |
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| 引用本文： | 王川,刘原子,魏亚琴,毛婷,杨宇泽,俞海山,张钊,万学瑞.腾冲嗜热厌氧杆菌Cas2原核表达及生物信息学分析[J].微生物学杂志,2021(2):10-16. |
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| 作者姓名： | 王川 刘原子 魏亚琴 毛婷 杨宇泽 俞海山 张钊 万学瑞 |
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| 作者单位： | 甘肃农业大学 动物医学院，甘肃 兰州 730070;陕西梅里众诚动物保健有限公司，陕西 西安 712034;甘肃省微生物资源开发利用重点实验室;甘肃省科学院生物研究所厌氧微生物中心，甘肃 兰州 730000;北京市畜牧总站, 北京 100101 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31500067）；甘肃省科技计划项目重点研发计划项目（18YF1NA077）；甘肃农业大学2018年学生科研训练计划项目 (SRTP，20180327 20180328)；甘肃省科学院应用研究与开发项目（2018JK-07，2019HZ-03，2020JK-03） |
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| 摘 要： | 为研究CRISPR/Cas系统及其相关蛋白Cas2(TTE2657)在腾冲嗜热厌氧杆菌热适应中的作用,应用PCR技术构建了原核重组质粒pET-28a::cas2,并在大肠埃希菌BL21表达Cas2蛋白;结合生物信息学软件对cas2编码蛋白的基本理化性质、氨基酸同源性、空间结构及蛋白质相互作用网络进行预测和分析。结果显示,成功构建了原核表达载体pET-28a::cas2并在大肠埃希菌BL21中得到表达,Cas2分子质量大小为9.9 ku,主要以可溶性形式存在;qRT-PCR显示cas2 mRNA在60℃和75℃高表达;生物信息学分析显示cas2基因其完整的ORF全长264 bp,编码88个氨基酸,其中Ile(14)、Ser(14)、Phe (12)含量较高,等电点为9.31,不存在跨膜结构。其蛋白质二级空间结构以α-螺旋、无规则卷曲、β-折叠为主,蛋白互作预测网络显示Cas2与Cas3、Cas5、Cas7等其家族大部分蛋白存在相互作用。进化树分析显示腾冲嗜热厌氧杆菌cas2基因与厌氧菌芽胞杆菌B7M1同源性最高(39.5%)。腾冲嗜热厌氧杆菌cas2编码蛋白是一种亲水性蛋白,在原核系统能高效表达。本研究为嗜热蛋白质的热稳定性机制的研究提供参考。
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| 关 键 词： | 腾冲嗜热厌氧菌 cas2基因 qRT-PCR 原核表达 生物信息学分析 |
Prokaryotic Expression and Bioinformatics Analysis of Cas2 in Thermoanaerobacter tengcongensis |
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| WANG Chuan,LIU Yuan-zi,WEI Ya-qin,Mao Ting,YANG Yu-ze,YU Hai-shan,ZHANG Zhao,WAN Xue-rui.Prokaryotic Expression and Bioinformatics Analysis of Cas2 in Thermoanaerobacter tengcongensis[J].Journal of Microbiology,2021(2):10-16. |
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| Authors: | WANG Chuan LIU Yuan-zi WEI Ya-qin Mao Ting YANG Yu-ze YU Hai-shan ZHANG Zhao WAN Xue-rui |
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| Institution: | Coll. of Vet. Med., Gansu Agric. Uni., Lanzhou 730070;Shaanxi Meili Zhongcheng Animal Health Care Co. Ltd.,Xi''an 712034;Key Lab. of Microb. Res. Exploit. & Appl. of Gansu Prov. Inst. of Biol., Gansu Prov. Acad. of Sci., Ctr. for Anaerob. Microes, Lanzhou 730000;Beijing Anim. Husbandry Sta., Beijing 100101 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Thermoanaerobacter tengcongensis cas2 gene qRT-PCR prokaryotic expression bioinformatics analysis |
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