嗜热革节孢GH1 BGL1进口端位点对酶活性及葡萄糖耐受性的影响 |
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引用本文: | 刘玉姣,高金鹏,刘娇娇,李多川.嗜热革节孢GH1 BGL1进口端位点对酶活性及葡萄糖耐受性的影响[J].菌物研究,2018(1). |
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作者姓名: | 刘玉姣 高金鹏 刘娇娇 李多川 |
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作者单位: | 山东农业大学植物保护学院菌物学系; |
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摘 要: | 糖苷水解酶第一家族(GH1)β-葡萄糖苷酶(BGL1)有葡萄糖耐受性,进口端位点对酶活性及葡萄糖耐受性有很大影响,但具体作用机制尚不清楚。对嗜热革节孢GH1 BGL1进口端的W168、L173、F348、W349、C169、F180、D237、Y179、A260、H307、N335和E437这12个氨基酸残基进行定点突变,将突变酶与野生酶(WT)在毕赤酵母中表达,表达产物纯化后进行酶活性和葡萄糖耐受性测定。与WT相比,所有突变酶活性均有所降低,其中W168H、N335F和W349G几乎丧失活性。突变F180H、D237S、A260N和H307Y的Km低于WT,所有突变的kcat都降低。除L173Q外,其余突变都保持葡萄糖耐受性,在高浓度(400 mmol/L)葡萄糖时,Y179F和D237S酶活受到显著抑制。本研究表明,进口端位点对酶活性及葡萄糖耐受性均具有一定影响,催化活性通道的结构特异性可能是葡萄糖耐受机制。
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关 键 词: | β-葡萄糖苷酶 定点突变 进口端 葡萄糖耐受性 |
The Substrate Entrance Residues of GH1 BGL1 from Scytalidium thermophilium Affect Enzyme Activity and Glucose Tolerance |
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