福寿螺（Ampullaria crossean）内源性多功能纤维素酶基因的克隆

迄今为止已克隆的动物纤维素酶基因都是编码内切—β—1，4—葡聚糖酶或β—葡萄糖苷酶的，还没有有关动物外切—β—1，4—葡聚糖酶基因的报道。并且，动物是否对植物细胞壁的另一主要成分木聚糖具有水解能力也依然是个疑问。已经由草食性软体动物福寿螺的胃液中纯化得到一种纤维素酶，该酶同时具有外切β—1，4—葡聚糖酶、内切β—1，4—葡聚糖酶和内切β—1，4—木聚糖酶等三种活性，是一种多功能纤维素酶(命名为EGX)。在此基础上，从福寿螺胃组织中克隆得到的EGX cDNA开放阅读框全长为1185bp，共编码395个氨基酸。由氨基酸顺序同源和活性部位的保守顺序的比较分析，EGX可归属于糖苷水解酶第10家族。该多功能纤维素酶cDNA在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达的产物具有水解外切β—1，4—葡聚糖酶底物(pNPC)，羧甲基纤维素(内切β—1，4—葡聚糖酶的底物)和木聚糖(木聚糖酶的底物)的活力。另外也从福寿螺卵巢组织中获得编码福寿螺多功能纤维素酶．EGX基因，长度为4892bp，含有9个外显子和8个内含子。8个内含子分别位于开放阅读框的74bp、122bp、280bp、336bp、473bp、646bp、753bp和972bp处。以上结果证明了多功能纤维素酶EGX是福寿螺自身产生的，同时也证明了福寿螺具有与微生物相似的纤维素酶系，即也含有内源性的外切β—1，4—葡聚糖酶活力组分。

Isolation of a Multi-functional Endogenous Cellulase Gene from Mollusc, Ampullaria crossean