| P—选择素凝集素—EGF功能域的克隆、表达及其单克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 周同,宋巍,王锋,倪培华,陈楠,张冬青,余奇文.P—选择素凝集素—EGF功能域的克隆、表达及其单克隆抗体制备[J].生物化学与生物物理学报,2003,35(2):172-176. |
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| 作者姓名： | 周同 宋巍 王锋 倪培华 陈楠 张冬青 余奇文 |
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| 作者单位： | 上海第二医科大学瑞金医院肾脏内科，上海第二医科大学瑞金医院肾脏内科，上海第二医科大学瑞金医院肾脏内科，上海第二医科大学瑞金医院肾脏内科，上海第二医科大学瑞金医院肾脏内科，上海市免疫研究所，上海市免疫研究所 上海200025，上海200025 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 (No .39970 340 )~~ |
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| 摘 要： | 制备特异性抗人P 选择素的凝集素 表皮生长因子 (L EGF)功能域的单克隆抗体。利用特异引物 ,通过RT PCR从外周血血小板中扩增出人P 选择素的L EGF功能域基因 ,将其克隆至pET42b( )载体中 ,测序验证后转染大肠杆菌BL2 1,经诱导表达了C端融合 6×His的蛋白质。融合蛋白质经分离纯化后 ,免疫Balb/c小鼠 ,应用杂交瘤技术 ,通过间接ELISA筛选阳性克隆。获得 3株可稳定分泌抗L EGF功能域单抗的杂交瘤细胞株 (B10、F3和H5 )。其亚型分别为IgG2 、IgG1和IgG3;轻链均为κ型。所获的单抗对LPS刺激活化的人脐静脉内皮细胞均有特异性结合反应 ,并可在体外阻断经凝血酶激活的血小板与中性粒细胞间的粘附。表明所获的单抗可特异性识别结合天然P 选择素 ,具有体外抗活化血小板与中性粒细胞粘附的功能 ,为进一步应用此单抗进行P 选择素结构和功能及抗粘附治疗研究提供了实验基础。
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| 关 键 词： | P-选择素 功能域 原核表达 单克隆抗体 功能 |
Cloning, Expression of the Lectin-EGF Domain of P-Selectin, and Preparation of Its Monoclonal Antibody |
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| ZHOU Tong ,SONG Wei,WANG Feng,NI Pei-Hua,CHEN Nan,ZHANG Dong-Qing,YU Qi-Wen.Cloning, Expression of the Lectin-EGF Domain of P-Selectin, and Preparation of Its Monoclonal Antibody[J].Acta Biochimica et Biophysica Sinica,2003,35(2):172-176. |
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| Authors: | ZHOU Tong SONG Wei WANG Feng NI Pei-Hua CHEN Nan ZHANG Dong-Qing YU Qi-Wen |
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| Institution: | ZHOU Tong *,SONG Wei,WANG Feng,NI Pei-Hua,CHEN Nan,ZHANG Dong-Qing1,YU Qi-Wen1 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | P-selectin domains prokaryotic expression monoclonal antibody functions |
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