| 应用毕氏酵母高效表达耐高温植酸酶 |
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| 引用本文： | 彭日荷,郭美锦,等.应用毕氏酵母高效表达耐高温植酸酶[J].生物化学与生物物理学报,2002,34(6):725-730. |
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| 作者姓名： | 彭日荷 郭美锦 |
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| 作者单位： | 上海市农业科学院生物技术研究中心、上海市农业遗传育种重点实验室 上海201106
(彭日荷，熊爱生，李贤，范惠琴，姚泉洪)，华东理工大学生物工程学院 上海200237
(郭美锦)，华东理工大学生物工程学院 上海200237(张嗣良) |
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| 基金项目： | 上海市科委重大项目 (No .993913002 )，上海永业农科生物工程公司资助~~ |
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| 摘 要： | 自然界很难获得大量的耐高温植酸酶。采取连续延伸PCR方法 ,按照毕氏酵母的偏爱密码 ,合成 1.3kb烟熏曲霉耐高温植酸酶基因 fphy。合成基因与野生型基因核苷酸序列同源性为 74 % ,但编码的氨基酸序列一致。将耐高温植酸酶基因fphy插入毕氏酵母高效表达载体 pPIC9中 ,与分泌信号肽序列融合 ,通过同源重组将耐高温植酸酶基因整合到酵母染色体中 ,通过SDS PAGE检测和表达产物的酶活性筛选 ,得到重组转化子 ,证明植酸酶获得有效分泌和高效表达。经过 5L小罐高密度发酵 ,蛋白质表达量为 5 .6 g/L ;每毫升发酵液中植酸酶的活力单位达 130 0 0 0u ;表达产物耐高温性很强 ,90℃处理 80min后仍有 4 0 %的活性。
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| 关 键 词： | 热稳定植酸酶 基因合成 高效表达 毕氏酵母 |
High Expression of a Heat-stable Phytase inPichia pastoris |
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| PENG Ri-He,XIONG Ai-Sheng,LI Xian,FAN Hui-Qin,YAO Quan-Hong ,GUO Mei-Jin ,ZHANG Si-Liang.High Expression of a Heat-stable Phytase inPichia pastoris[J].Acta Biochimica et Biophysica Sinica,2002,34(6):725-730. |
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| Authors: | PENG Ri-He XIONG Ai-Sheng LI Xian FAN Hui-Qin YAO Quan-Hong GUO Mei-Jin ZHANG Si-Liang |
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| Institution: | PENG Ri-He,XIONG Ai-Sheng,LI Xian,FAN Hui-Qin,YAO Quan-Hong *,GUO Mei-Jin 1,ZHANG Si-Liang 1 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | heat-stable phytase gene synthesis high expression Pichia pastoris |
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