皖南尖吻蝮蛇毒Ⅰ型金属蛋白酶AcutolysinA的表达、重折叠及其生物学活性

将皖南尖吻蝮蛇毒Ⅰ型金属蛋白酶acutolysinA基因克隆进原核表达载体pBASD/gⅢA后得到重组表达质粒pDS,在0.02%的L-（ ）-阿拉伯糖的诱导下，质粒pDS在E.coliTOP10中表达了重组acutolysinA。与其天然形式相比，重组蛋白质在N端和C端各增加了22个和8个氨基酸残基（均源于载体序列）。并以包含体的形式存在于胞质中，表达量约占菌体总蛋白质的5%-10%。在经8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍变性及体外复性后，重组蛋白质获得了良好的免疫学及生物学活性，Western印迹及ELISA实验表明，天然金属蛋白酶acutolysinA与重组蛋白质具有良好的免疫反应相关性。动物实验表明，复性的重组蛋白质能明显引起皮下出血，其最低出血剂量约为20μg左右，1mmol/LEDTA,1mmol/LEGTA及3mmol/L咪唑均能不同程度的抑制天然及重组金属蛋白酶的出血活性，PMSF没有明显的抑制效果。并对出血毒金属蛋白酶的出血机制进行了探讨。