| 重组单链胰岛素在含有巯基试剂的变性剂中的解折叠 |
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| 引用本文： | 郭占云,冯佑民,等.重组单链胰岛素在含有巯基试剂的变性剂中的解折叠[J].生物化学与生物物理学报,2001,33(4):431-436. |
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| 作者姓名： | 郭占云 冯佑民 |
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| 作者单位： | [1]中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，分子生物学国家重点实验室，上海200031 [2]中国科学 |
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| 摘 要： | 重组单链胰岛素(PIP)含有3对二硫键。在含有巯基试剂的变性剂中，PIP产生二硫键交换从而形成一系列具有不同解折叠程度的二硫键异构体混合物。分别用高压液相色谱（HPLC）和圆二色性（CD）光谱分析了PIP在含有0．2mmol/L2－巯基乙醇的尿素和盐酸胍中的解中的解折叠程度。PIP二硫键异构体混合物通过胰蛋白酶酶解并用质谱测定酶解片段的分子量，证明PIP确实产生了二硫键交换。同时还分离纯化了PIP的一种主要非天然二硫键异构体并研究了它重新折叠成天然构象的情况。观察到PIP只有一种热力学稳定的二硫键配对方式，PIP的非天然二硫键异构体在巯基试剂存在的条件下可以高效转化为天然二硫键配对。还将PIP解折叠和再折叠的情况与胰岛素样生长因子－I（IGF－I）及胰岛素做了比较：胰岛素和PIP只折叠成一种热力学稳定的三级结构，IGF－I却折叠成两种热力学稳定的二硫键异构体；胰岛素的双链重组需缓慢进行，而PIP却可以快速折叠。
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| 关 键 词： | 重组单链胰岛素 变性 解折叠 二硫键 再折叠 试剂 |
Unfolding of Recombinant Single-chain Insulin in Denaturants Containing Thiol Reagents |
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| Keywords: | recombinant single chain insulin denaturation unfolding disulfide refolding |
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