腺病毒载体介导的肝癌细胞专一性自杀基因表达

构建由肝癌细胞专一的ａｆｐ基因表达调节元件控制自杀基因ＨＳＶ－ｔｋ的穿梭质粒，将它与缺陷型腺病毒载体重组，得到ＡｄｒＡＦＰＴＫ病毒。经ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交等证实它们含ａｆｐ元件和ｔｋ基因。空斑形成试验表明病毒效价达１×１０１５ｐｆｕ／Ｌ。同时构建由ＣＭＶ启动子控制ｔｋ基因的类似载体作为对照。将这两个重组腺病毒分别感染ＡＦＰ阳性（ＨｅｐＧ２）或阴性（ＨｅＬａ，ＢＲＬ－３Ａ）细胞株（ｍ．ｏ．ｉ．＝１００），以丙氧鸟苷（ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ，ＧＣＶ）处理后，用ＭＴＴ法测定杀伤细胞的效应。结果，ＡｄＣＭＶＴＫ感染这三种细胞后，ＧＣＶ半杀伤浓度分别为１．３、２、＜１μｍｏｌ／Ｌ；但是，ＡｄｒＡＦＰＴＫ感染的ＨｅＬａ和ＢＲＬ－３Ａ细胞的ＧＣＶ半杀伤浓度都＞１０００μｍｏｌ／Ｌ，而对ＨｅｐＧ２细胞只有＜１μｍｏｌ／Ｌ，表现出极高的细胞专一性。重组腺病毒ＡｄｒＡＦＰＴＫ可望用于肝癌的专一性基因治疗