大鼠甘氨肽酰化单氧酶基因的克隆与表达 |
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引用本文: | 江智红,杨毅,屠红旻,杨新颖,夏其昌,李伯良,王德宝.大鼠甘氨肽酰化单氧酶基因的克隆与表达[J].生物化学与生物物理学报,1996(6). |
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作者姓名: | 江智红 杨毅 屠红旻 杨新颖 夏其昌 李伯良 王德宝 |
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作者单位: | 中国科学院上海生物化学研究所 |
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基金项目: | 国家“863”高技术研究发展计划资助 |
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摘 要: | 本文采用原位杂交及PCR方法,从大鼠脑cDNA库中,筛选到3个大鼠甘氨肽酰化单氧酶(rPAM)基因片段。经DNA全序列分析表明,它们跨越rPAM-2全部编码区。通过点突变、PCR重组技术等,分别拼接出此双功能酶的rPHM(氧化酶)、rPAL(裂解酶)及其rPAM全酶基因,并构建了多种大肠杆菌表达质粒。经温敏诱导。高效表达了rPAM-N260片段,并制各获得阳性抗血清,可用于免疫检测天然或重组的PAM。而SDS-PAGE和Westernblot分析结果显示,rPHM和rPAM在大肠杆菌中均获得了表达,其中rPHM表达量占全菌总蛋白的10%以上。进一步研究还发现,通过采用低温和加二价铜离子诱导表达,可提高rPHM产物的可溶性及稳定性。
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关 键 词: | 酰胺化,甘氨肽酰化单氧酶,氧化酶,裂解酶,PCR重组 |
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