| 绵羊胞内单精子注射技术 |
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| 引用本文： | 苟克勉,安晓荣,田见辉,陈永福.绵羊胞内单精子注射技术[J].分子细胞生物学报,2002,35(2):103-108. |
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| 作者姓名： | 苟克勉 安晓荣 田见辉 陈永福 |
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| 作者单位： | 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，动物科技学院，中国农业大学农业生物技术国家重点实验室 北京 100094 |
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| 摘 要： | 本文的主要目标是建立绵羊胞内单精子注射技术(intracyioplasmic sperm injection,ICSI)。并且尝试了ICSI技术生产绵羊转基因胚胎的可能性。实验1比较了绵羊卵母细胞孤雌激活的3种化学方法。结果显示,Ionomvcin/3 h/6-dimethylaminopurine(6-DMAP)和Ionomycin激活胚的卵裂率(71.7%和91.8%)和囊胚率(17.4%和11%)显著(P<0.01)高于Ca~(2+)激活胚(18.4%和0)。Ionomycin/3 h/6-DMAP激活胚的囊胚发育形态和比例相对较高。实验2中,活精子注射至卵母细胞质后,用Ionomycin/3 h/6-DMAP激活,排出第二极体(PB2)的71枚ICSI胚胎用SOFaaBSA溶液培养,卵裂率为71.8%(51/71),显著(P<0.01)高于体外受精(41.4%,IVF)和阴性对照胚胎(30.2%,sham-ICSI)。培养7天后,sham-ICSI组没有囊胚生成;ICSI和IVF胚胎的囊胚率分别为7.0%(5/71)和16.1%(9/56),两者差异不显著(P>0.05)。这些ICSI囊胚在冷冻前后均能孵化,显示初步建立了绵羊ICSI技术。另外,我们探索了ICSI技术生产转基因胚胎的可能性,-20℃冻融1次的死精子与pEGFP-N1质粒共注射,33枚2-细胞期ICSI胚胎中,2枚可见GFP蛋白。其中1枚停止发育,另外1枚继续发育至16-细胞期,仍然可见GFP基因的表达。4枚解冻的ICSI囊胚手术移植给2只发情同期化受体绵羊,60天时,B超未见怀孕。本文初步结果表明,ICSI技术生产转基因绵羊有可能性,需深入研究。
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| 关 键 词： | 绵羊 孤雌激活 ICSI 转基因 胚胎 |
| 修稿时间： | 2001年7月12日 |
SHEEP TRANSGENIC EMBRYOS PRODUCED BY INTRACYTOPLASMIC SPERM INJECTION |
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| GOU Ke Mian AN Xiao Rong TIAN Jian Hui CHEN Yong Fu.SHEEP TRANSGENIC EMBRYOS PRODUCED BY INTRACYTOPLASMIC SPERM INJECTION[J].Journal of Molecular Cell Biology,2002,35(2):103-108. |
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| Authors: | GOU Ke Mian AN Xiao Rong TIAN Jian Hui CHEN Yong Fu |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Sheep Parthenogenesis Intracytoplasmic sperm injection Transgene Embryo |
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