| 超声波辅助农杆菌介导CP基因转化番小瓜(Carioca papaya L.)的有效方法 |
| |
| 引用本文： | 姜玲,MAOKA Tetsuo,KOMORI Sadao,FUKAMACHI Hiroshi,KATO Hidenori,OGAWA Kazunori.超声波辅助农杆菌介导CP基因转化番小瓜(Carioca papaya L.)的有效方法[J].分子细胞生物学报,2004(3). |
| |
| 作者姓名： | 姜玲 MAOKA Tetsuo KOMORI Sadao FUKAMACHI Hiroshi KATO Hidenori OGAWA Kazunori |
| |
| 作者单位： | 华中农业大学园艺林学学院国家果树种质资源室内保存中心，日本北海道国家农业研究中心，日本盛岗岩手大学农业生物技水系，日本农林水产省国际农业研究中心冲绳亚热带试验站，日本农林水产省国际农业研究中心冲绳亚热带试验站，日本农林水产省国际农业研究中心冲绳亚热带试验站 武汉43007C，日本农林水产省国际农业研究中心，冲绳亚热带试验站1091-1，062-8555，020-8550，1091-1，1091-1，1091-1 |
| |
| 基金项目： | 研究基金由日本国际农业研究中心提供~~ |
| |
| 摘 要： | 本研究探索了通过农杆菌介导,超声波辅助处理,转化番木瓜胚性愈伤组织,获得转基因植株的有效方法。分别将含有日本PLDMV 外壳蛋白基因(PTi-Epj-TL-PLDMV)和含有台湾PRSV 菌株、美国夏威夷PRSV 菌株、泰国PRSV 菌株及日本PLDMV 菌株的多元外壳蛋白基因编码序列(PTi-NP-YKT)插入双元载体质粒pGA482G,借助于农杆菌系LBA4404将双元载体上的外壳蛋白基因和新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)转移到番木瓜品种Sunset 的胚性愈伤组织中,从而获得抗卡那霉素的转化再生植株。试验着重在转化方法上进行探索。结果表明,农杆菌过夜培养后,用高渗透压培养液(1/2 MS 6%蔗糖 1%葡萄糖,pH 5.7)调整至光密度OD_(600(?)m)=0.15-0.20,然后用该菌液感染材料30min,其间辅以超声波处理,可以大大提高转化效率。用15ml 无菌离心管装载胚性愈伤材料进行15s 的超声波处理,在80块被转化的胚性愈伤中获得21个CP 基因G 转化系(26.3%),而在对照处理64块胚性愈伤中仅获得1个转化系(1.6%);在经过15s 的超声波处理48块被转化的胚性愈伤中获得8个CP 基因B 转化系(16.7%),而在对照处理25块胚性愈伤中未出现转化系。上述操作方法用在两种CP 基因转化上均表现出相似的效果。试验还表明:120mg/L 是卡那霉素抗性筛选的最佳浓度。抗性筛选9个月后,在421块胚性愈伤组织中产生了42个抗卡那霉素的转化系。所获得的转基因植株分别用PCR 和Southern 印迹杂交进行了鉴定。
|
| 关 键 词： | 超声波 农杆菌介导的转化 CP基因 胚性愈伤组织 番木瓜(Carioca papaya L.) |
AN EFFICIENT METHOD FOR SONICATION ASSISTED AGROBACTEIUM-MEDIATED TRANSFORMATION OF COAT PROTEIN (CP) CODING GENES INTO PAPAYA (CARICA PAPAYA L.) |
| |
| JIANG Ling.AN EFFICIENT METHOD FOR SONICATION ASSISTED AGROBACTEIUM-MEDIATED TRANSFORMATION OF COAT PROTEIN (CP) CODING GENES INTO PAPAYA (CARICA PAPAYA L.)[J].Journal of Molecular Cell Biology,2004(3). |
| |
| Authors: | JIANG Ling |
| |
| Institution: | JIANG Ling~ |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Agrobacteium-mediated transformation embryonic calli Sonication Carica papaya L |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
|
