| 青霉素G酰化酶β亚基Ser~(579)、Arg~(580)的定点突变研究 |
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| 引用本文： | 费俭,林庆聪,蔡国强,张懋弧,黄勤,王应魁,郭礼和,张其玖.青霉素G酰化酶β亚基Ser~(579)、Arg~(580)的定点突变研究[J].分子细胞生物学报,1992(3). |
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| 作者姓名： | 费俭 林庆聪 蔡国强 张懋弧 黄勤 王应魁 郭礼和 张其玖 |
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| 作者单位： | 中国科学院上海细胞生物学研究所
(费俭，蔡国强，张懋弧，黄勤，王应魁，郭礼和)，南京大学生物系
(林庆聪)，中国科学院北京生物物理研究所(张其玖) |
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| 摘 要： | 比较青霉素酰化酶(PGA)和青霉素结合蛋白的一级结构,我们推测PGAβ亚基中565～595肽段可能和酶的底物结合功能有关。为此我们将2.6 kb 长的完整的PGA 基因克隆到pTz 18 U 中构建成质粒pTZGA,并用定点突变的技术对Ser~(579)。和Arg~(580)两个氨基酸残基进行了突变研究。在所得到的四种突变子中·Ser~(579)→Gly~(579),Arg~(580)→Gly~(580),Arg~(580)→Glu~(580),Arg~(580)→Lys~(580))Glu~(580)和Gly~(580)没有酶活力,Lys~(580)约有30%的酶活力,Gly~(579)约有70%的酶活力。用ELISA 方法检测了四种突变子和野生型酶蛋白表达量,没有显著差异,这表明Arg~(580)对酶活性有重要意义,是酶活力中心的重要组成部分,可能与催化活性有关。
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| 关 键 词： | 青霉素G酰化酶 蛋白质工程 定点突变 结构与功能 |
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