| 重组人钙调素的制备及其对细胞增殖作用影响的研究 |
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| 引用本文： | 李晓军,武建国,司峻岭,郭大文,徐建平.重组人钙调素的制备及其对细胞增殖作用影响的研究[J].分子细胞生物学报,2001,34(2):131-136. |
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| 作者姓名： | 李晓军 武建国 司峻岭 郭大文 徐建平 |
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| 作者单位： | 李晓军（南京军区南京总医院全军医学检验中心,南京210002）
武建国（南京军区南京总医院全军医学检验中心,南京210002）
司峻岭（南京军区南京总医院全军医学检验中心,南京210002）
郭大文（南京军区南京总医院全军医学检验中心,南京210002）
徐建平（南京军区南京总医院全军医学检验中心,南京210002） |
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| 基金项目： | 江苏省自然科学基金资助项目(BK95141307). |
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| 摘 要： | 用PCR方法获得人钙调素基因Ⅲ(hCaMⅢcDNA),将其插入表达载体pBV220,构建重组表达质粒hCaMⅢ/pBV220,阳性重组子在大肠杆菌DH5α中经温度诱导可高效表达CaM蛋白,经15%SDS-PAGE分析,可观察到一分子量与理论值相符(约17kD)的诱导表达条带.进一步分析表达产物的性质表明,CaM主要以可溶性形式表达.Westernblot结果证实,17kD的表达条带可与标准鼠抗CaMMcAb起特异反应.用Phenyl-SepharoseCL-4B疏水亲和层析法纯化重组菌超声上清表达产物,可获得纯度达95%以上的CaM,每1L菌液可获CaM纯品3～4mg.生物活性测定结果提示,rhCaM具有与标准人脑CaM(Sigma)同样的激活NAD激酶的活性.将K562细胞及SP2/0细胞分别接种于24孔或96孔培养板,加入不同浓度rhCaM、CaM拮抗剂三氟拉嗪(TFP),培养48h后,用MTI比色法检测细胞增殖状况.rhCaM在一定浓度范围内与细胞增殖率成显著正相关;CaM拮抗剂TFP可抑制细胞增殖.将rhCaM加入已受TFP抑制的细胞,可恢复正常的细胞增殖功能.
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| 关 键 词： | 钙调素 基因表达 大肠杆菌 细胞增殖三氟拉嗪 K562 SP2/0 |
| 修稿时间： | 2000年6月29日 |
HIGH - LEVEL EXPRESSION OF HUMAN CALMODULIN IN E. COLI AND ITS EFFECTS ON CELL PROLIFERATION |
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| LI Xiao Jun WU Jian Guo SI Jun Lin GUO Da Wen XU Jian Ping.HIGH - LEVEL EXPRESSION OF HUMAN CALMODULIN IN E. COLI AND ITS EFFECTS ON CELL PROLIFERATION[J].Journal of Molecular Cell Biology,2001,34(2):131-136. |
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| Authors: | LI Xiao Jun WU Jian Guo SI Jun Lin GUO Da Wen XU Jian Ping |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Calmodulin Gene expression Escherichia coli Cell proliferation Trifluoperazine K562 Sp2/0 |
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