| 超声波辅助农杆菌介导CP基因转化番木瓜(Carioca papaya L.)的有效方法 |
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| 引用本文： | 姜玲 MAOKA Tetsuo KOMORI Sadao,FUKAMACHI Hiroshi KATO Hidenori OGAWA Kazunori.超声波辅助农杆菌介导CP基因转化番木瓜(Carioca papaya L.)的有效方法[J].分子细胞生物学报,2004,37(3):189-198. |
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| 作者姓名： | 姜玲 MAOKA Tetsuo KOMORI Sadao FUKAMACHI Hiroshi KATO Hidenori OGAWA Kazunori |
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| 摘 要： | 本研究探索了通过农杆菌介导,超声波辅助处理,转化番木瓜胚性愈伤组织,获得转基因植株的有效方法.分别将含有日本PLDMV外壳蛋白基因(PTi-Epj-TL-PLDMV)和含有台湾PRSV菌株、美国夏威夷PRSV菌株、泰国PRSV菌株及日本PLDMV菌株的多元外壳蛋白基因编码序列(PTi-NP-YKT)插入双元载体质粒pGA482G,借助于农杆菌系LBA4404将双元载体上的外壳蛋白基因和新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)转移到番木瓜品种Sunset的胚性愈伤组织中,从而获得抗卡那霉素的转化再生植株.试验着重在转化方法上进行探索.结果表明,农杆菌过夜培养后,用高渗透压培养液(1/2
MS+6%蔗糖+1%葡萄糖,pH 5.7)调整至光密度OD600nm=0.15-0.20,然后用该菌液感染材料30min,其间辅以超声波处理,可以大大提高转化效率.用15m1无菌离心管装载胚性愈伤材料进行15s的超声波处理,在80块被转化的胚性愈伤中获得21个CP基因G转化系(26.3%),而在对照处理64块胚性愈伤中仅获得1个转化系(1.6%);在经过15s的超声波处理48块被转化的胚性愈伤中获得8个CP基因B转化系(16.7%),而在对照处理25块胚性愈伤中未出现转化系.上述操作方法用在两种CP基因转化上均表现出相似的效果.试验还表明120mg/L是卡那霉素抗性筛选的最佳浓度.抗性筛选9个月后,在421块胚性愈伤组织中产生了42个抗卡那霉素的转化系.所获得的转基因植株分别用PCR和Southern印迹杂交进行了鉴定.
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| 关 键 词： | 超声波 农杆菌介导的转化 CP基因 胚性愈伤组织 番木瓜(Carioca papaya L.) |
AN EFFICIENT METHOD FOR SONICATION ASSISTED AGROBACTEIUM-MEDIATED TRANSFORMATION OF COAT PROTEIN(CP) CODING GENES INTO PAPAYA (CARICA PAPAYA L.) |
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| Abstract.AN EFFICIENT METHOD FOR SONICATION ASSISTED AGROBACTEIUM-MEDIATED TRANSFORMATION OF COAT PROTEIN(CP) CODING GENES INTO PAPAYA (CARICA PAPAYA L.)[J].Journal of Molecular Cell Biology,2004,37(3):189-198. |
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