胃癌细胞中Ras 基因的表达、突变分析及新剪接型Kras△E2 的发现

目的：传统Ras家族由Kras，Hras 和Nras 基因组成，这类基因的点突变经常在人类肿瘤中发现，突变热点位于12,13,61 位 密码子。ERas 基因是2003 年在鼠胚胎干（ES）细胞中发现的,其cDNA编码的蛋白与Kras，Hras 和Nras分别有46%，43%和47% 的相似性，故属于新的Ras 家族成员，近几年发现ERas 基因的表达与胃癌密切相关，而传统Ras 基因在胃癌细胞中的表达及突 变情况系统报道较少，本文旨在研究传统Ras基因Kras，Hras，Nras及其家族新成员ERas 基因在胃癌细胞中的表达和突变情况。 方法：选用7 株不同来源不同分化程度的胃癌细胞系，利用RT-PCR 及real-timePCR 检测Ras基因在这些胃癌细胞系中的表达， 并通过测序对传统Ras基因突变热点12,13,61 位密码子及ERas 基因全长进行突变分析。结果：①Ras基因在这些胃癌细胞系中 均有不同程度的表达，其中Hras 和Nras 基因在各株细胞中表达水平均一，而Kras 和ERas 基因则呈差异性表达；②在这些胃癌 细胞中传统Ras基因突变热点12,13,61位密码子不存在突变，ERas基因全长亦未检测到突变．③发现Kras 基因一新的剪接型， 特点为第一、三外显子直接拼接，缺失第二外显子，命名为Kras△E2。结论：与在其他肿瘤中不同，传统Ras 基因在胃癌细胞中不 存在突变热点，家族新成员ERas 基因全长亦无突变，在国际上首次报道新剪接型Kras△E2，从而得出创新性结论：Ras基因家族 在胃癌细胞中并不是通过热点突变导致持续活化而致癌，而可能是通过ERas 基因表达量的调节或形成新的剪接型Kras△E2 而 致癌。另外，Kras 基因是一被受国际关注的肿瘤基因，新剪接型的发现可能会对Kras 基因致癌机制产生新的认识，意义重大。