| Ad-hBNP重组腺病毒的构建 |
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| 引用本文： | 宋衍秋,赵莉莉,毛用敏,崔让庄.Ad-hBNP重组腺病毒的构建[J].现代生物医学进展,2009,9(5). |
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| 作者姓名： | 宋衍秋 赵莉莉 毛用敏 崔让庄 |
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| 作者单位： | 1. 天津医科大学,天津,300070
2. 天津市胸科医院,天津,300050 |
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| 摘 要： | 目的:构建携带人BNP cDNA片段高效重组腺病毒Ad-hBNP,为实验提供研究工具.方法:从人心肌组织提取的RNA,用RT-PCR方法中获得hBNP扩增片段,与pUCm-T载体连接构成pUC-hBNP重组质粒;用KpnI、SalI分别双酶切pUC-hBNP和pAd-Track-CMV,将目的片段插入pAd-Track-CMV构建重组质粒pAdTrack-CMV-hBNP;pAdTrack-CMV-hBNP重组质粒经Pmcl酶切线性化后,电转法转入含有腺病毒骨架质粒的E.coli BJ5183感受态细胞中,同源重组获得重组质粒pAdEasy-hBNP;经BamHI、PacI酶切鉴定及基因序列检测后,重组成功的pAdEasy-hBNP经阳离子脂质体法转染HEK293T细胞,经过包装、扩增和纯化后,测定病毒滴度,电镜检测病毒形态.结果:转染HEK293T细胞5-6天GFP呈"彗星"状;重组腺病毒滴度为1.1×1012V.P/ml;电镜检测重组腺病毒为多面体结构.结论:应用Ad-Easy缺陷性腺病毒载体系统成功构建重组腺病毒Ad-hBNP,为进一步基因治疗研究提供分子生物学工具.
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| 关 键 词： | 脑钠肽 腺病毒载体 同源重组 基因治疗 |
Construction of Recombinant Adenovirus Ad-hBNP |
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| SONG Yan-qiu,ZHAO Li-li,MAO Yong-min,CUI Rang-zhuang.Construction of Recombinant Adenovirus Ad-hBNP[J].Progress in Modern Biomedicine,2009,9(5). |
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| Authors: | SONG Yan-qiu ZHAO Li-li MAO Yong-min CUI Rang-zhuang |
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