| 一种高效经济的小鼠胰岛细胞分离纯化新技术 |
| |
| 引用本文： | 梁瑜祯,杨月莲,罗静思,刘丹,冯乐平.一种高效经济的小鼠胰岛细胞分离纯化新技术[J].现代生物医学进展,2009,9(10). |
| |
| 作者姓名： | 梁瑜祯 杨月莲 罗静思 刘丹 冯乐平 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，广西科技厅青年基金，广西科技厅自然科学基金 |
| |
| 摘 要： | 目的:建立一种经济高效的小鼠胰岛细胞分离纯化方法,为进行NOD小鼠的胰岛移植提供实验条件.方法:将5-7周龄、体重20～25 g的雄,陛昆明小鼠的胆总管结扎,并逆行Hank's液和胶原酶P灌注和分离消化,依次加入84%、67%、50%浓度的Histopaque介质后进行不连续密度梯度离心纯化胰岛细胞.双硫腙(dithizon,DTZ)和台盼兰染色分别鉴定胰岛细胞.用含5.6mmol/L葡萄糖DMEM培养液体外培养胰岛细胞,培养后的第3、5、7、9、11天取细胞上清检测胰岛素水平,并用16.7mmol/L的高浓度葡萄糖进行刺激,检测胰岛素水平确定胰岛细胞功能.结果:每个胰腺的胰岛细胞收获量在1200±124个,且纯度和活性均大于90%;体外培养9天内胰岛细胞基础胰岛素分泌水平无显著差异,至第11天时则明显减少(P＜0.05);应用16.7mmol/L葡萄糖刺激后,第5、7、9、11天的胰岛素分泌水平较第3天的明显减少(P＜0.05),然而在第7天、9天、11天时的胰岛素水平较第5天时显著降低.结论:胆总管逆行注射Hank's液和胶原酶P消化消化和不连续密度梯度Histopaque纯化的方法可以获得大量状态良好的胰岛,且胰岛细胞数量多,分泌状态良好.本分离方法是一种经济高效的胰岛细胞分离方法,同时离体后于5.6mmol/L葡萄糖DMEM培养第3天胰岛细胞胰岛素储备功能最佳,为移植研究的最佳状态.
|
| 关 键 词： | 胰岛素 分离和纯化 细胞培养 |
A Novel Technique of Pancreatic Islet Cell Isolation and Purification |
| |
| LIANG Yu-zhen,YANG Yue-lian,LUO Jing-si,LIU Dan,FENG Le-ping.A Novel Technique of Pancreatic Islet Cell Isolation and Purification[J].Progress in Modern Biomedicine,2009,9(10). |
| |
| Authors: | LIANG Yu-zhen YANG Yue-lian LUO Jing-si LIU Dan FENG Le-ping |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
