3β-羟基类固醇脱氢酶基因的克隆表达及其性质研究 |
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引用本文: | 赵晓雅,李 婕,余 磊,郑桂兰,王洪钟.3β-羟基类固醇脱氢酶基因的克隆表达及其性质研究[J].现代生物医学进展,2018(2):201-204. |
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作者姓名: | 赵晓雅 李 婕 余 磊 郑桂兰 王洪钟 |
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作者单位: | 清华大学生命科学学院; |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(21476124) |
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摘 要: | 目的:构建3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)异源表达系统,进一步探究其酶学性质。方法:通过分子生物学方法克隆来源于Mycobacterium neoaurum菌株的3β-羟基类固醇基因,构建重组质粒,运用HPLC方法检测酶反应体系的产物。结果:本实验构建了表达载体pet28a-hsd。优化诱导表达条件,发现3β-HSD异源表达的最适温度为16℃~25℃,37℃时蛋白表达为包涵体。此外,同一温度下不同IPTG浓度诱导的表达结果差异不大。利用纯化后的蛋白进行酶特性的研究,结果表明在3β-HSD酶反应体系中,30℃达到较高的酶活性;pH 7.5~9.0之间,酶活力较强,pH低于7.0时,酶活性明显下降;有机助溶剂DMSO对酶反应有抑制作用;Fe~(3+)和Cu~(2+)对酶反应有抑制作用。结论:本实验探究了分枝杆菌中3β-羟基类固醇脱氢酶的相关性质,为进一步研究该酶在类固醇代谢中的功能提供基础。
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关 键 词: | 3β-羟基类固醇脱氢酶 类固醇 酶活性 |
收稿时间: | 2017/5/23 0:00:00 |
修稿时间: | 2017/6/18 0:00:00 |
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