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| 肌球蛋白轻链激酶CaM结合位点突变体的构建 | |
| 引用本文： | 魏晓晴,张月,赵莹,吕广艳,崔颖,王辉,高颖.肌球蛋白轻链激酶CaM结合位点突变体的构建[J].现代生物医学进展,2009,9(17). |
| 作者姓名： | 魏晓晴 张月 赵莹 吕广艳 崔颖 王辉 高颖 |
| 作者单位： | 1. 辽宁省医学细胞分子生物学重点实验室 2. 大连医科大学生化教研室,辽宁,大连,116044 3. 辽宁省医学细胞分子生物学重点实验室;大连医科大学生化教研室,辽宁,大连,116044 |
| 摘 要： | 目的:平滑肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chainkinase,MLCK)具有激酶活性和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为探寻MLCK的非激酶活性区域对MLCK活性的影响,本实验利用分子生物学技术构建了肌球蛋白轻链激酶CaM结合位点突变体,并纯化出重组的MLCK表达的蛋白质,为深入研究MLCK的非激酶活性在调节平滑肌收缩过程中的分子机制提供了实验基础.方法:利用野生型MLCK全长的cDNA序列设计CaM结合位点的突变引物,利用PCR技术进行定点突变,获得CaM结合位点的突变体(△CaM/MLCK).在大肠杆茵中表达重组CaM结合位点的突变体(△CaM/MLCK),通过亲和层析及凝胶过滤进行分离纯化重组蛋白,SDS-PAGE检测表达及纯化的重组蛋白.结果:构建重组MLCK钙调蛋白结合位点突变体(△CaM/MLCK),△CaM/MLCK在大肠杆菌中以可溶形式大量表达并得到纯化.结论:成功构建重组MLCK钙调蛋白结合位点突变体(△CaM/MLCK)并获得纯化的表达蛋白质. |
| 关 键 词： | 肌球蛋白轻链激酶 钙调蛋白 突变体 |
Construction of Calmodulin-binding site mutant of myosin light chain kinase |
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| WEI Xiao-qing,ZHANG Yue,ZHAO Ying,LV Guang-yan,CUI Ying,WANG Hui,GAO Ying.Construction of Calmodulin-binding site mutant of myosin light chain kinase[J].Progress in Modern Biomedicine,2009,9(17). | |
| Authors: | WEI Xiao-qing ZHANG Yue ZHAO Ying LV Guang-yan CUI Ying WANG Hui GAO Ying |
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