| 组蛋白去乙酰化酶HDAC2突变体构建及其SUMO修饰E3连接酶功能研究 |
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| 引用本文： | 郭韡,熊渊,黄宏,邢伟,李向云,徐祥.组蛋白去乙酰化酶HDAC2突变体构建及其SUMO修饰E3连接酶功能研究[J].现代生物医学进展,2013,13(6):1005-1008. |
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| 作者姓名： | 郭韡 熊渊 黄宏 邢伟 李向云 徐祥 |
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| 作者单位： | 1. 第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室 重庆 400012
2. 重庆市巴南区人民医院急诊科 重庆 401320 |
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| 摘 要： | 目的:针对人源HDAC2外显子拼接功能区(CDS)基因,运用双管法突变体构建技术,构建HDAC2去乙酰化酶功能失活的片段缺失与关键位点突变体,检测突变体的SUMO化修饰E3连接酶功能活性,探究此HDAC2新功能是否受到其固有的去乙酰化酶功能的影响.方法:设计HDAC2 100-322位氨基酸密码子缺失的片段突变体引物与142位H→A点突变体引物,利用HDAC2的pcDNA3.1真核表达质粒为模板,通过耐热Fusion酶PCR反应双管扩增相应的单链DNA,并经退火、模板酶切、乙醇纯化、感受态转化、抗性平板筛选、测序鉴定获得两种HDAC2去乙酰化酶功能失活的pcDNA3.1真核表达质粒.免疫印迹检测突变体质粒在细胞中的表达,荧光素酶(LUC)报告基因实验检测其SUMO化修饰E3连接酶功能活性.结果:成功构建HDAC2去乙酰化功能失活的片段缺失突变体pcDNA3.1/HDAC2 (DEL 100-322AA)与关键位点突变体pcDNA3.1/HDAC2(142 H→A).C-myc标签的免疫印迹检测显示两种突变体在细胞中可稳定表达.将突变体转染进入三种细胞,LUC报告基因分析结果显示突变体仍具有E3连接酶功能活性.结论:HDAC2的E3连接酶功能不依赖于其去乙酰化酶活性,并且E3连接酶功能结构域位于其序列C端.
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| 关 键 词： | HDAC2 突变体 SUMO修饰 E3连接酶 |
Construction Histone Deacetylation Enzyme 2 Mutants and Study their Function on SUMO E3 Ligase Activity |
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