| 一种同时分离培养大鼠肝细胞及肝枯否细胞技术的建立 |
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| 引用本文： | 王敏,兰亚,胡皓,时永全,韩英,周新民.一种同时分离培养大鼠肝细胞及肝枯否细胞技术的建立[J].现代生物医学进展,2013,13(13):2420-2424. |
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| 作者姓名： | 王敏 兰亚 胡皓 时永全 韩英 周新民 |
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| 作者单位： | 1. 第四军医大学西京消化病医院肿瘤生物学重点实验室 陕西西安710032
2. 延安大学附属医院 陕西延安716000 |
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| 基金项目： | 国家863计划，陕西省科技统筹创新工程计划项目 |
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| 摘 要： | 目的:建立简便、经济的同步分离培养肝细胞及kupffer细胞的方法.方法:采用肝脏原位灌洗结合离体胶原酶灌注消化的方法获得总细胞悬液,差速离心分离肝细胞及肝非实质细胞,经多次低速离心可分离肝细胞,经percoll密度梯度离心以及选择性贴壁法得到纯化的kupffer细胞.台盼蓝染色鉴定细胞活力.使用倒置相差显微镜、HE染色、PAS染色及白蛋白免疫组织化学染色对培养肝细胞的形态及功能进行检测.使用光学显微镜、荧光显微镜及CD68免疫荧光染色鉴定分离的kupffer细胞.结果:体外成功的同步分离培养了肝细胞及kupffer细胞,肝细胞产率为1.37± 0.53× 108/大鼠,kupffer得率为3.45± 0.41×106/g肝脏.细胞存活率及纯度都可达90％.肝细胞培养24h后呈典型肝细胞形态,7天后仍具有糖原合成和白蛋白合成能力.贴壁后的kupffer细胞呈典型的星型或三角形,且其标志分子CD68免疫荧光染色阳性.结论:应用改良的原位灌注方法可以很好的同时分离具有活性及功能的肝细胞和kupffer细胞.
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| 关 键 词： | 肝细胞 枯否细胞 分离方法 大鼠 |
Establishment of a Technique to Isolate and Culture of Rat Hepatocytes and Kupffer Cells Simultaneously |
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