肾脏脱细胞基质结构功能重建的初步研究

目的:本实验利用多种脱细胞剂通过半自动体外循环灌注洗脱肾脏细胞,摸索出最佳脱细胞剂种类及脱细胞方案.方法:以健康兔肾为研究对象,采用半自动体外循环灌注法,在10-15 ml/min流速及不同浓度、温度条件下经肾动脉灌注各种脱细胞剂,观察肾脏灌注过程中变化,灌注结束解剖肾脏,大体观察后行苏木精-伊红(HE)染色及组织形态学观察,重点观察肾小球、肾小管细胞结构的变化.结果:比较理想的肾脏脱细胞方案是1％Ⅳ型胶原酶-37℃,20 min,该酶能在相对较短的时间内洗脱部分肾实质细胞而对肾脏基质未造成明显损伤.该方案灌注时间短,能减少肾脏热缺血时间,有助于肾脏再生.其次是0.5％胰蛋白酶-25℃,2h,该方案能使肾小球细胞比较彻底的脱出,只留基质部分,对肾小管作用较小,但该方案用时较长,已达到肾脏体外耐受缺血的极限,理论上肾脏灌注后很可能会因缺血缺氧时间过长而坏死,故不推荐使用.洗脱效果最强的脱细胞剂是SDS,但其对肾脏实质结构造成不可恢复的破坏,尤其是引起基底膜断裂不利于肾实质细胞再生.其他脱细胞方案均不理想.结论:本研究证实通过选择适当的脱细胞剂,配合适合的温度、浓度、灌注压等条件,是可以实现肾脏部分脱细胞基质的,为下一步研究衰竭肾脏的部分脱细胞基质甚至是在体灌注乃至脱细胞后肾脏结构功能的重建提供了实验依据.

Preliminary Study about Reconstruction of the Structure and Function of Decellular Matrix Kidney