| 复合PCR扩增人mtDNA HVR方法的初探 |
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| 引用本文： | 李琳,邵金陵,段小红,李雪娟,刘振霞.复合PCR扩增人mtDNA HVR方法的初探[J].现代生物医学进展,2013,13(7):1360-1363. |
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| 作者姓名： | 李琳 邵金陵 段小红 李雪娟 刘振霞 |
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| 作者单位： | 1. 第四军医大学口腔医院 陕西西安710032
2. 陕西师范大学生命科学学院 陕西西安710062 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目，陕西省社发公关课题基金项目 |
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| 摘 要： | 目的:建立一种高效的扩增线粒体DNA高可变区(mtDNA HVR)的方法.方法:本研究选取5例健康成人静脉血,用人血全基因组DNA试剂盒,提取全基因组DNA,设计引物,用复合PCR方式,对线粒体DNA中的高可变区进行扩增.复合扩增的方式为:用6对套叠引物分开进行两次独立的PCR,扩增mtDNA HVR.第一次扩增用3对引物,目标DNA片段基本涵盖整个线粒体DNA的高可变区,扩增后得到互不重叠的3个短片段,分别为113 bp,126 bp和131bp.第二次复合扩增用其余的3对引物,目标片段基本重叠在第一次扩增所得的目标片段的区域内,扩增得到3个互不重叠的片段为124 bp,133 bp和93bp.所有扩增产物经过纯化后测序.结果:复合PCR方式获得的mtDNA HVR基因序列完整,5个样本均出现特异性条带,电泳结果条带单一、清晰.结论:复合扩增PCR方法对mtDNA HVR区的扩增效率高,测序结果稳定,结合6对套叠引物,不但保证了序列的完整性,另外,两次独立的PCR也减少了PCR反应过程中错配的发生,此法也适用于保存时间较久的古代线粒体DNA短片段的研究.复合扩增PCR还展示出了潜在的高产量的特点,相对传统PCR显示了其更多的优势.
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| 关 键 词： | mtDNA HVR Multiplex-PCR 套叠引物 |
Multiplex-PCR to Amplify Human mtDNA HVR |
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