| 人Notch1受体shRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定 |
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| 引用本文： | 王晓辉,罗芸,吕同德,杨宵鹏,唐瑜,哈小琴.人Notch1受体shRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定[J].现代生物医学进展,2013,13(15):2846-2851. |
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| 作者姓名： | 王晓辉 罗芸 吕同德 杨宵鹏 唐瑜 哈小琴 |
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| 作者单位： | 1. 第四军医大学细胞生物学教研室细胞工程研究中心 陕西西安710033 ;兰州军区兰州总医院医学实验中心甘肃省干细胞与基因药物重点实验室 甘肃兰州730050
2. 兰州军区兰州总医院医学实验中心甘肃省干细胞与基因药物重点实验室 甘肃兰州730050 |
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| 摘 要： | 目的:构建人特异性受体Notch1短发夹RNA重组腺病毒载体,探讨其对人脐带间充质干细胞中Notch1表达的影响,以便进一步研究Notch1的生物学功能.方法:设计合成Notch1序列干扰序列,插入到pGenesil-1.1上构建重组质粒,取阳性克隆进行酶切及DNA测序鉴定.通过同源重组,构建含目的基因的重组腺病毒质粒栽体pGsadeno-Notch1-shRNA.经PacI线性化后脂质体介导转染到HEK 293细胞,包装后得到腺病毒颗粒.产生的重组腺病毒体外转染人脐带间充质千细胞,RT-PCR和Western blot 检测特异性shRNA对人脐带间充质干细胞中Notch1蛋白在mRNA及蛋白表达水平的抑制效果.结果:经酶切及DNA测序重组腺病毒质粒构建正确.重组腺病毒转染人脐带间充质干细胞3d后,RT-PCR及Western blot检测,可显著下调细胞内Notch1的转录及蛋白表达水平.对Notch1 mRNA和蛋白表达的抑制率分别为70.31％和86.97％,具有统计学意义(P＜0.05).结论:成功构建了表达人Notch1受体shRNA的重组腺病毒载体,为研究Notch1在肿瘤学中的生物学作用及机制奠定基础.
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| 关 键 词： | Notch1 腺病毒载体 RNA干扰 基因治疗 |
Construction and Identification of Recombinant Adenovirus Vector Expressing the shRNA of Human Notchl Receptor |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Notch1 Adenovirus vector RNA interference Gene therapy |
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