| 弓形虫基因缺陷虫株建立方法的初步研究 |
| |
| 引用本文： | 谭逵,张琼,范久波,谢荣华,蒋立平,官剑武,舒衡平,吴翔.弓形虫基因缺陷虫株建立方法的初步研究[J].现代生物医学进展,2008,8(6):1016-1019. |
| |
| 作者姓名： | 谭逵 张琼 范久波 谢荣华 蒋立平 官剑武 舒衡平 吴翔 |
| |
| 作者单位： | 中南大学湘雅医学院寄生虫学教研室,湖南,长沙,410078 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金
,
湖南省十.五重大专项基金
,
湖南省十一.五重点学科建设经费联合资助项目 |
| |
| 摘 要： | 目的:应用电穿孔技术转染TgP24基因敲除转染质粒于弓形虫RH,探讨电穿孔技术的应用条件,以及TgP24基因敲除质粒转染虫株在不同哺乳动物细胞中筛选的最适条件.方法:设定所需的电穿孔参数、条件,如电压,电容,脉冲次数,电击杯的大小,电转染缓冲液,电穿孔后,将弓形虫悬浮液分别转移到长有不同贴壁细胞的培养瓶中,37℃,5%CO2(体积分数)的培养箱中培养,观察弓形虫的生长状况,并对不同电穿孔参数、条件下的弓形虫存活率进行比较.12hr后换成加有福来霉素的完全培养基中选择培养,不同时间观察虫体及细胞生长情况;在细胞中选择培养10天后,收集虫体,4℃下福来霉素处理7天,再回复到细胞内用选择培养基培养5天,收集虫体,腹腔注射昆明小鼠,大量收集弓形虫用于提取RNA进行RT-PCR.结果:优化电穿孔条件后的弓形虫存活率得到提高(P＜0.05);在选择浓度为5.0μg/ml-7.5μg/ml的福来霉素培养基中,筛选虫株采用L929细胞做为宿主细胞最为适合;RT-PCR结果显示L929细胞筛选基因敲除虫株的效果较好.结论:初步确定了弓形虫电穿孔技术的应用条件,以及Tg P24基因敲除质粒转染虫株在不同哺乳动物细胞中的最佳筛选条件;获得了较好的转染效率,为进一步研究弓形虫Tg P24基因敲除株的生物学特性打下了良好的基础.
|
| 关 键 词： | 弓形虫 电穿孔 基因敲除 哺乳动物细胞 弓形虫 基因缺陷 虫株 建立方法 研究 Strain Knockout Toxoplasma Gondii Method Establishment 生物学特性 转染效率 最佳 效果 细胞筛选 显示 宿主细胞 选择培养基 浓度 优化 |
| 文章编号： | 1673-6273(2008)06-1016-04 |
| 修稿时间： | 2008年2月10日 |
Preliminary Research of Establishment Method on Toxoplasma Gondii Knockout Strain |
| |
| TAN Kui,ZHANG Qiong,FAN Jiu-bo,XIE Rong-hua,JIANG Li-ping,GUAN Jian-wu,SHU Heng-ping,WU Xiang.Preliminary Research of Establishment Method on Toxoplasma Gondii Knockout Strain[J].Progress in Modern Biomedicine,2008,8(6):1016-1019. |
| |
| Authors: | TAN Kui ZHANG Qiong FAN Jiu-bo XIE Rong-hua JIANG Li-ping GUAN Jian-wu SHU Heng-ping WU Xiang |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
