甲基沿阶草酮甲对干眼症小鼠的治疗作用及机制

摘要 目的：探讨甲基沿阶草酮甲（Methyl ophiopogonanone A，MOA）对干眼症（Dry eye disease，DED）小鼠的治疗作用及机制。方法：将雄性BALB/c小鼠（7~8周龄，体重18-22 g）随机分为5组（n=12）：对照组、DED组、DED+10MOA组、DED+20MOA组和DED+40MOA组。对照组为正常小鼠，其他组小鼠双眼滴入质量浓度为0.2%的苯扎氯铵溶液诱导DED模型小鼠，每日1次，连续6周。建模后，对照组和DED组小鼠腹腔注射0.5 mL的1%二甲基亚砜溶液，DED+10MOA组、DED+20MOA组和DED+40MOA组小鼠依次腹腔注射0.5 mL剂量为10、20和40 mg/kg的MOA，每天1次，共给药28天。治疗结束后，检测各组小鼠的泪液分泌量和角膜荧光素钠染色分级，并进行角膜苏木素伊红（Hematoxylin and eosin，HE）染色、结膜过碘酸-雪夫（Periodic acid-Schiff，PAS）染色和角膜TUNEL染色。通过Western blot检测角膜K10蛋白表达水平。检测角膜氧化应激指标丙二醛（Malondialdehyde，MDA）和超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）水平。通过实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应检测角膜中肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bcl2-associated X，Bax）和B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2，Bcl-2）的mRNA水平。结果：与对照组比较，DED组小鼠的泪液分泌量降低（P<0.05），角膜荧光素钠染色分级升高（P<0.05），角膜出现明显病变，结膜杯状细胞数量降低（P<0.05）。角膜Bcl-2 mRNA相对表达量、SOD水平降低（P<0.05），角膜TUNEL阳性率、Bax mRNA相对表达量、K10蛋白相对表达量、MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平升高（P<0.05）。与DED组比较，DED+10MOA组、DED+20MOA组和DED+40MOA组的泪液分泌量升高（P<0.05），角膜荧光素钠染色分级降低（P<0.05），角膜病变减轻，结膜杯状细胞数量升高（P<0.05）。角膜TUNEL阳性率、Bax mRNA、K10蛋白相对表达量、MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平降低（P<0.05），Bcl-2 mRNA相对表达量、SOD水平升高（P<0.05）。结论：甲基沿阶草酮甲有效减轻干眼症小鼠的症状及眼表病变，其机制可能与抑制杯状细胞凋亡和氧化应激及炎症反应有关。

Therapeutic Effect and Mechanism of Methyl Ophiopogonanone A on Dry Eye Disease in Mice