| 串联亲和标签LOX蛋白慢病毒表达载体的构建及在乳腺癌细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 刘侠,刘剑仑,蒋奕,唐玮,杨华伟,韦薇.串联亲和标签LOX蛋白慢病毒表达载体的构建及在乳腺癌细胞中的表达[J].现代生物医学进展,2015,15(29):5613-5616. |
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| 作者姓名： | 刘侠 刘剑仑 蒋奕 唐玮 杨华伟 韦薇 |
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| 作者单位： | 广西医科大学附属肿瘤医院乳腺外科 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（81160321）；广西自然科学基金项目（2013GXNSFAA019235） |
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| 摘 要： | 目的:为了研究赖氨酰氧化酶(Lysyl Oxidase,LOX)及其相互作用蛋白质在乳腺癌中的功能,构建带StrepⅡ/FLAG串联亲和标签的重组LOX蛋白慢病毒表达载体并在乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达。方法:设计引物通过聚合酶链式反应获得带StrepⅡ/FLAG串联亲和标签的LOX蛋白(LOX-SF)的亲本质粒,双酶切后鉴定测序克隆至GV303表达载体,连同慢病毒包装质粒共同转染293T得到GV303/LOX-SF慢病毒,将其转染MDA-MB-231细胞,使用荧光定量PCR和蛋白质印迹实验对细胞中重组蛋白LOX-SF进行检测。结果:通过串联亲和纯化获得LOX-SF重组蛋白,使用标签抗体成功鉴定到LOX-SF重组蛋白在MDA-MB-231细胞内稳定表达。结论:GV303/LOX-SF的构建,使带StrepⅡ/FLAG融合标签的LOX蛋白在MDA-MB-231中成功表达及纯化,为筛选和研究LOX及其相互作用蛋白在乳腺癌细胞内的功能奠定了实验基础。
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| 关 键 词： | 串联亲和纯化 标签 赖氨酰氧化酶 慢病毒载体 相互作用蛋白质 |
Construction of the Lentivirus Expression Vector Carrying TandemAffinity
Purification Tag for Lysyl Oxidase and Its Expression in Breast Cancer Cell |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Tandemaffinity purification Tag Lysyl oxidase Lentivirus vector Interaction protein |
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