PRRSV—PCV2重组病毒的构建及PRRSV转录调控机制研究 |
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引用本文: | 郑海红,孙志,朱兴全,袁世山.PRRSV—PCV2重组病毒的构建及PRRSV转录调控机制研究[J].微生物与感染,2008,3(3). |
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作者姓名: | 郑海红 孙志 朱兴全 袁世山 |
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作者单位: | 1. 中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室,农业部动物寄生虫病重点实验室,上海,200241;华南农业大学兽医学院,广州,510642 2. 中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病研究室,农业部动物寄生虫病重点实验室,上海,200241 3. 华南农业大学兽医学院,广州,510642 |
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基金项目: | 国家自然科学基金,上海市浦江人才项目 |
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摘 要: | 目的 本研究旨在探讨猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染性cDNA克隆作为猪圆环病毒(PCV2)的主要免疫原开放阅读框架2(ORF2)表达载体的可行性,以及利用重组病毒对PRRSV复制转录过程进行解剖.方法 以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作,分别在pAPRRS的ORF1和ORF2间,ORF5和ORF6间,ORF6和ORF7间插入PCV2 ORF2,且对拯救病毒vPCV进行了病毒学及分子生物学鉴定.结果 vPCV的sgmRNA2.1利用了PRRSV mRNA2的转录调控序列(TRS),形成由PRRSV GP2和PCV2衣壳蛋白组成的sgmRNA2.1.外源基因的插入同时也导致重组病毒启用新的TRS 而产生3条新亚基因组,其中sgmRNA2.2和sgmRNA2.3采用PCV2上的序列来取代PRRSV RNA2本身的TRS;另一条sgmRNA2.4则为非经典型亚基因组,其TRS在PRRSV相应的AUG下游.结论 2株PRRSV-PCV2重组病毒可以稳定传代,为进一步研发PRRSV遗传标疫苗奠定了基础;插入片段上一些类似TRS序列的引入及插入片段(718bp)过长导致PRRSV ORF2 TRS 本身和其两翼序列的RNA结构变化是引起重组病毒遗传不稳定性的最主要原因;PRRSV可以利用TRS样外源序列作为转录启动子,这为进一步解剖PRRSV复制转录过程奠定了基础.
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关 键 词: | 猪繁殖与呼吸道综合征病毒 猪圆环病毒Ⅱ型 载体表达 转录调控序列 |
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