西方蜜蜂表皮蛋白基因apd-like转录起始位点的定位及cDNA序列的分析

Apidermin蛋白家族是根据蜜蜂表皮蛋白apidermin 1-3（APD 1-3）而命名的一个新型的昆虫结构性表皮蛋白家族。为了鉴定西方蜜蜂Apis mellifera基因组序列上毗邻基因簇apd 1-3的一个预测基因座LOC727145是否为一个新的apd基因，本研究在用5′LongSAGE标签定位该基因的转录起始位点（TSS）的基础上，利用其中的3条5′LongSAGE标签序列作为上游引物，通过RT-PCR方法克隆了该基因的cDNA序列（GenBank登录号： GU358197, GU358199, GU358198）。生物信息学分析发现，基因座LOC727145含有2个外显子和1个“GT-AG”型内含子，其cDNA序列富含GC（70％），可编码一条长152 aa残基的高度疏水性多肽。此多肽序列的氨基酸组成与蜜蜂APD 1-3表皮蛋白类似， 富含Ala， Gly， Pro， Leu 和Val 5种氨基酸（占77％）， 其中Ala残基含量最高（29％）。该多肽序列与蜜蜂APD-1表皮蛋白序列的相似性为50％， 且其N末端的预测信号肽序列与APD 蛋白的信号肽序列类似。5′LongSAGE标签的基因组定位结果显示，基因座LOC727145在雄蜂头部中表达丰度很高，RNA PolⅡ可从6个不同的TSS上以不同效率起始转录，其中由一个优势TSS上起始了90％的转录。本研究为apidermin表皮蛋白家族增添了一个新成员， 命名为apidermin-like (apd-like)。

TSS identification and cDNA cloning of a cuticular protein gene apd-like from the Western honeybee(Apis mellifera)