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| 利用RNAi技术沉默小菜蛾类钙粘蛋白基因 | |
| 引用本文： | 杨中侠,吴青君,王少丽,文礼章,徐宝云,张杰,张友军.利用RNAi技术沉默小菜蛾类钙粘蛋白基因[J].昆虫学报,2009,52(8):832-837. |
| 作者姓名： | 杨中侠 吴青君 王少丽 文礼章 徐宝云 张杰 张友军 |
| 作者单位： | 1. 中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京,100081;湖南农业大学生物安全科学技术学院,长沙,410128 2. 中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京,100081 3. 湖南农业大学生物安全科学技术学院,长沙,410128 4. 中国农业科学院植物保护研究所,北京,100193 |
| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划(973计划)，国家自然科学基金，国家高技术研究发展计划(863计划)，农业部项目 |
| 摘 要： | RNA干扰（RNA interference, RNAi）是一种调控基因表达的方法, 其通过体外合成一段与内源靶基因同源的双链RNA（dsRNA）或siRNA, 导入生物体内, 使内源靶基因中同源mRNA降解, 从而达到阻抑基因表达的目的。类钙粘蛋白（cadherin-like protein）是位于昆虫中肠刷状缘膜囊(brush border membrane vesicles, BBMV)上与钙粘蛋白(cadherin)结构相似的物质, 是多种昆虫体内Bt杀虫蛋白的受体。本研究利用基因特异引物通过RT-PCR扩增了小菜蛾类钙粘蛋白基因的2个片段（CAD1和CAD2）, 合成相对应的双链RNA（double-stranded RNA, dsRNA）; 并将dsRNA通过显微注射导入小菜蛾3龄幼虫体内, 测定了不同靶位点、不同剂量、不同检测时间对目的基因mRNA表达量的影响。结果表明: 将70 nL CAD1对应的dsRNA注射到幼虫体内48 h后, 基因表达量显著下降, 72 h后恢复。免疫印迹检测结果表明, 类钙粘蛋白在注射dsRNA 48 h后幼虫BBMV中的含量明显下降。本实验成功实现了小菜蛾类钙粘蛋白基因的沉默, 该体系的成功建立为利用RNAi技术分析小菜蛾及其他鳞翅目昆虫基因的功能提供了参考。 |
| 关 键 词： | 小菜蛾 苏云金芽胞杆菌 类钙粘蛋白 RNA干扰 基因沉默 |
Silencing of cadherin-like gene in the diamondback moth, Plutella xylostella (Lepidoptera: Plutellidae), using RNAi technique |
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| YANG Zhong-Xia,WU Qing-Jun,WANG Shao-Li,WEN Li-Zhang,XU Bao-Yun,ZHANG Jie,ZHANG You-Jun.Silencing of cadherin-like gene in the diamondback moth, Plutella xylostella (Lepidoptera: Plutellidae), using RNAi technique[J].Acta Entomologica Sinica,2009,52(8):832-837. | |
| Authors: | YANG Zhong-Xia WU Qing-Jun WANG Shao-Li WEN Li-Zhang XU Bao-Yun ZHANG Jie ZHANG You-Jun |
| Abstract: | |
| Keywords: | Plutella xylostella Bt cadherin-like protein RNAi gene silencing |
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