烟夜蛾组织蛋白酶B酶原基因的克隆、序列分析和原核表达 |
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引用本文: | 赵艳艳,刘建兵,罗梅浩,郭线茹,原国辉.烟夜蛾组织蛋白酶B酶原基因的克隆、序列分析和原核表达[J].昆虫学报,2008,51(11):1121-1128. |
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作者姓名: | 赵艳艳 刘建兵 罗梅浩 郭线茹 原国辉 |
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作者单位: | 河南农业大学植物保护学院,郑州,450002 |
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基金项目: | 国家烟草专卖局科技攻关项目
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摘 要: | 利用反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术从烟夜蛾Helicoverpa assulta (Guenée)雌虫卵巢中扩增得到了组织蛋白酶B酶原基因(cathepsin B,CB)cDNA片段,将其克隆至pMD19-T载体。测序结果表明, 该片段长度为1 017 bp,含有组织蛋白酶B酶原基因完整开放阅读框架(ORF)(GenBank登录号:EF154237)。序列分析结果显示:烟夜蛾组织蛋白酶B(HassCB)编码338个氨基酸残基,预测N-末端含有长度为21个氨基酸残基的信号肽序列;去除信号肽序列后,预测成熟蛋白分子量为35.5 kDa,等电点为5.96。氨基酸序列比对结果表明,HassCB与其他昆虫的组织蛋白酶B酶原氨基酸序列有较高的一致性。将去除信号肽序列的HassCB(HassCBa)重组到表达载体pGEX-4T-1中,并转入原核细胞中表达,SDS-PAGE和Western印迹分析表明:该基因能在大肠杆菌BL21中表达,电泳检测到一条大约61 kDa的目的条带,与预测的融合蛋白分子量相符。用该基因制备多克隆抗体并测得该抗体对重组表达的HassCBa的效价为1∶51 200。通过免疫印迹检测证实,此抗体既能识别重组表达的HassCBa,又能识别烟夜蛾卵巢匀浆液中的HassCB。
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关 键 词: | 烟夜蛾 组织蛋白酶B 基因克隆 序列分析 原核表达 免疫印迹 |
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