兰州熊蜂蜂王头部产卵相关microRNA生物信息学分析

【目的】头部是熊蜂感觉和取食中心，也是生理行为的指挥中心。microRNA（miRNA）参与重要生理行为的调控。本研究初步探索了产卵和未产卵兰州熊蜂Bombus lantschouensis蜂王头部差异表达miRNA及其靶基因，以期探明蜂王头部miRNA在产卵过程中作用。【方法】以本土优良蜂种兰州熊蜂 B. lantschouensis 为材料，利用Solexa高通量测序技术对产卵和未产卵蜂王头部miRNA进行测序，运用生物信息学软件对miRNA及其靶基因进行预测；并应用qPCR技术验证极显著差异表达的miRNA。【结果】共获得兰州熊蜂产卵和未产卵蜂王头部miRNA的clean data数，分别为14 228 864和21 431 031 条reads；长度分析表明，在19~24 nt序列中22 nt序列数量最多,分别占产卵和未产卵蜂王序列的45.8%和45.1%。miRNA预测结果显示，共获得297个miRNA，其中270个为已知miRNA，有92个存在于蜜蜂中，其余178个分别存在于蜜蜂以外的其他物种中；另外27个为新的miRNA。在蜜蜂92个已知的miRNA中，在产卵蜂王头部中表达的共有91个，特异表达的有2个；在未产卵蜂王头部中表达的共有90个，特异表达的有1个。27个新的miRNA中，在产卵蜂王头部中表达的共有22个，特异表达的有2个；未产卵蜂王头部中表达的共有25个，特异表达的有5个。miRNA差异表达分析表明，在产卵与未产卵蜂王头部，共有8个已知miRNA表达量达到差异极显著水平（P<0.01）。qPCR结果表明，这8个表达差异极显著的miRNA均存在于熊蜂体内。在8个差异极显著的miRNA中，3个miRNA进行靶基因预测，发现它们共同调控9个靶基因，这些基因主要参与GTP结合和转录调控。【结论】本研究首次利用高通量测序技术鉴定了熊蜂头部组织的miRNA，并发现蜂王产卵与否受到miRNA差异表达的调控。结果为今后深入开展熊蜂miRNA功能验证及产卵调控机制研究奠定了基础。

Solexa sequencing and bioinformatics analysis of microRNA in the queen head of the bumblebee Bombus lantschouensis