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烟草甲谷胱甘肽S-转移酶基因LsGSTe1的表达及其与甲酸乙酯耐受性的关系
引用本文:严毅,许抗抗,杨洪,胡大鸣,杨文佳.烟草甲谷胱甘肽S-转移酶基因LsGSTe1的表达及其与甲酸乙酯耐受性的关系[J].昆虫学报,2020,63(1):1-10.
作者姓名:严毅  许抗抗  杨洪  胡大鸣  杨文佳
作者单位:(1. 贵州大学昆虫研究所, 贵州山地农业病虫害重点实验室, 贵阳 550025; 2. 贵阳学院生物与环境工程学院, 贵州省山地珍稀动物与经济昆虫重点实验室, 贵阳 550005; 3. 贵州大学烟草学院, 贵阳 550025; 4. 贵州中烟工业有限责任公司, 贵阳 550025)
摘    要:【目的】探究烟草甲Lasioderma serricorne谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase, GST)基因LsGSTe1的分子特性和生物学功能。【方法】在烟草甲转录组数据的基础上,利用RT-PCR技术扩增LsGSTe1基因,并进行生物信息学分析;采用qPCR技术检测LsGSTe1在烟草甲不同发育阶段(低龄幼虫、高龄幼虫、蛹、低龄成虫、高龄成虫)及高龄幼虫不同组织(表皮、中肠、脂肪体、马氏管)中的表达水平,以及在甲酸乙酯熏蒸胁迫后的5龄幼虫中的表达变化。进一步采用RNAi技术沉默烟草甲5龄幼虫LsGSTe1基因,通过生物测定分析烟草甲对熏蒸剂甲酸乙酯的敏感性变化。【结果】获得LsGSTe1基因的全长cDNA序列(GenBank登录号:MN480468),开放阅读框长684 bp,编码227个氨基酸,N端和C端均存在催化保守位点。系统发育分析表明该基因属于GSTs的Epsilon家族。qPCR结果表明,LsGSTe1在烟草甲不同发育阶段均有表达,且在高龄幼虫期的表达量较高;表达部位主要在幼虫脂肪体,其次为中肠和表皮,而在马氏管中的表达量最低。LC_(30)(10μL/L)和LC_(50)(20μL/L)浓度的甲酸乙酯对烟草甲5龄幼虫熏蒸胁迫后,LsGSTe1的表达水平显著升高,分别是对照组的2.96和5.80倍。RNAi结果发现,RNAi 48 h和72 h后,LsGSTe1的表达量分别下降了79.9%和83.0%,沉默效率显著;RNAi 72 h后,dsLsGSTe1注射组与对照(dsGFP组)相比,LC_(50)浓度的甲酸乙酯处理5龄幼虫的死亡率明显提高了32.4%。【结论】推测LsGSTe1基因可能参与了烟草甲对甲酸乙酯的代谢与解毒过程。

关 键 词:烟草甲  谷胱甘肽S-转移酶  基因表达  甲酸乙酯  RNA干扰  

Expression of glutathioneS-transferase gene LsGSTe1 and its relationship with ethylformate tolerance in the cigarette beetle,Lasioderma serricorne(Coleoptera: Anobiidae)
YAN Yi,XU Kang-Kang,YANG Hong,HU Da-Ming,YANG Wen-Jia.Expression of glutathioneS-transferase gene LsGSTe1 and its relationship with ethylformate tolerance in the cigarette beetle,Lasioderma serricorne(Coleoptera: Anobiidae)[J].Acta Entomologica Sinica,2020,63(1):1-10.
Authors:YAN Yi  XU Kang-Kang  YANG Hong  HU Da-Ming  YANG Wen-Jia
Abstract:
Keywords:Lasioderma serricorne  glutathione S-transferase  gene expression  ethyl formate  RNA interference  
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