| 中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交文库的构建 |
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| 引用本文： | 孙莉,岳金金,费东亮,李明,马鸣潇,宋铭忻.中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交文库的构建[J].昆虫学报,2019,62(5):572-577. |
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| 作者姓名： | 孙莉 岳金金 费东亮 李明 马鸣潇 宋铭忻 |
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| 作者单位： | (1. 东北农业大学动物医学学院, 哈尔滨 150030; 2. 锦州医科大学畜牧兽医学院, 辽宁锦州 121001) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31772760);锦州医科大学大学生创新训练项目(201828,201829) |
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| 摘 要： | 【目的】本研究旨在利用位点特异性重组技术(FullCoV)将中华蜜蜂 Apis cerana cerana 幼虫膜蛋白cDNA连接到pPR3-N载体上,构建中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交cDNA文库。【方法】提取2-3日龄中华蜜蜂工蜂幼虫总RNA;分离mRNA后,在反转录酶的作用下合成幼虫膜蛋白cDNA第1链,并合成双链cDNA。在双链cDNA的5′端加上带有重组序列的接头后,通过FullCoV技术与载体pPR3-N进行连接,然后将连接产物电转化到DH10B感受态细胞,构建中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交cDNA文库,并对该文库插入片段大小和文库滴度进行检测。【结果】通过FullCoV技术成功构建了中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交cDNA文库,经检测,中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母cDNA文库的总库容量为1.5×10^7 cfu,文库滴度为3×10^6 cfu/mL,重组率达到100%。【结论】本研究利用FullCoV技术成功构建了中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母cDNA文库,为进一步探究感染中华蜜蜂的病原微生物与宿主蛋白互作研究奠定了基础。
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| 关 键 词： | 中华蜜蜂 cDNA 文库 滴度 酵母双杂交 FullCoV技术 蛋白质相互作用 |
Construction of a yeast two-hybrid library for membrane proteins of Apis cerana cerana (Hymenoptera: Apidae) larvae |
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| SUN Li,YUE Jin-Jin,FEI Dong-Liang,LI Ming,MA Ming-Xiao,SONG Ming-Xin.Construction of a yeast two-hybrid library for membrane proteins of Apis cerana cerana (Hymenoptera: Apidae) larvae[J].Acta Entomologica Sinica,2019,62(5):572-577. |
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| Authors: | SUN Li YUE Jin-Jin FEI Dong-Liang LI Ming MA Ming-Xiao SONG Ming-Xin |
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| Institution: | (1. College of Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China; 2. College Animal Husbandry and Veterinary, Jinzhou Medical University, Jinzhou, Liaoning 121001, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Apis cerana cerana cDNA library titer yeast two-hybrid FullCoV technology protein-protein interaction |
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