| hVEGF165 和嵌合水蛭肽融合基因的构建、表达和活性检测 |
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| 引用本文： | 沈 雳,陈少萍,秦永文,蔡在龙.hVEGF165 和嵌合水蛭肽融合基因的构建、表达和活性检测[J].生物化学与生物物理进展,2005,32(11):1061-1068. |
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| 作者姓名： | 沈 雳 陈少萍 秦永文 蔡在龙 |
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| 作者单位： | 1. 第二军医大学长海医院心内科,上海,200433
2. 第二军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,上海,200433 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30200281). |
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| 摘 要： | 根据抗 PTCA 或支架后再狭窄的基因治疗需要多基因治疗的特点，用基因重组技术构建了 hVEGF165 和嵌合水蛭肽 (fused hirudin ， FH) 融合基因，并克隆到真核表达载体 pcDNA3.0 中，通过脂质体介导将 pcDNA3.0/hVEGF165 - FH 转染到人内皮细胞株 (ECV304) 中， RT-PCR 及蛋白质印迹证明融合基因 hVEGF165 - FH 在 ECV304 细胞中得到表达 ( 分子质量为 24 ku 左右 ). 通过体外活性检测——— MTT 法检测 hVEGF165 - FH 对 ECV304 细胞增殖的影响，通过体外血管生成分析 hVEGF165 - FH 对内皮细胞株 ECV304 增殖的影响 . 通过体外抗栓活性检测，表明表达产物具有促进内皮细胞株增殖及加快血管生成的作用，同时显著抑制了 ADP 诱导的血小板聚集率 (P < 0.05) 并显著延长 APTT 和 TT (P < 0.05) . 实验结果表明，融合基因在内皮细胞株中得到表达，表达的融合蛋白具有 hVEGF165 和嵌合水蛭肽 (FH) 的双重活性，这为以后的融合基因治疗再狭窄的动物实验打下了良好基础 .
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| 关 键 词： | 血管内皮生长因子，水蛭肽，融合基因， pcDNA3.0 ，载体构建，基因表达 |
| 收稿时间： | 05 16 2005 12:00AM |
| 修稿时间： | 2005-05-162005-06-30 |
Construction, Expression and Characterization of a Fusion Gene of hVEGF165 and Fused Hirudin Peptide |
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| SHEN Li,CHEN Shao-Ping,QIN Yong-Wen and CAI Zai-Long.Construction, Expression and Characterization of a Fusion Gene of hVEGF165 and Fused Hirudin Peptide[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2005,32(11):1061-1068. |
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| Authors: | SHEN Li CHEN Shao-Ping QIN Yong-Wen and CAI Zai-Long |
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| Institution: | Department of Cardiology of Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China;Department of Cardiology of Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China;Department of Cardiology of Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China;Department of Biochemistry and Molecular Biology,Department of Basic Medicine, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | vascular endothelial growth factor(VEGF) hirudin fusion gene pcDNA3 0 vector construction gene expression |
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