| 一个改进的PCR过程中聚合酶复制精确性测定系统的建立 |
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| 引用本文： | 杜汉森,徐迈.一个改进的PCR过程中聚合酶复制精确性测定系统的建立[J].遗传学报,1997,24(2):183-192. |
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| 作者姓名： | 杜汉森 徐迈 |
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| 作者单位： | 复旦大学遗传学研究所 |
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| 基金项目： | 国家“863”高科技发展计划生物技术领域资助 |
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| 摘 要： | 在大肠杆菌中建立了一套用于测定ＤＮＡ聚合酶在ＰＣＲ过程中复制精确性的系统，并测定了耐热ＦＤＤＮＡ聚合酶在ＰＣＲ扩增过程中的复制精确性。这一系统主要包括以质粒ｐＵＣ１１８和ｐＵＣ１１９为出发质粒所构建的一套共６个突变质粒，分别为ｐＦＤＦＰ１１８和ｐＦＤＦＰ１１９（＋１移码突变）、ｐＦＤＦＭ１１８和ｐＦＤＦＭ１１９（－１移码突变）、ｐＦＤＦＵ１１８和ｐＦＤＦＵ１１９（碱基置换突变）。这些突变质粒均不能进行ｌａｃＺ－α互补反应，因此在含有Ｘ－Ｇａｌ和ＩＰＴＧ的培养基上菌落呈白色。同时还构建了ＰＣＲ产物克隆载体ｐＦＤＦＬ１１８和ｐＦＤＦＬ１１９。以上述突变质粒为模板进行ＰＣＲ反应，取反应产物和ｐＦＤＦＬ１１８或ｐＦＤＦＬ１１９连接后转化到大肠杆菌中。若在ＰＣＲ过程中发生回复突变，则转化子在含有Ｘ－Ｇａｌ和ＩＰＴＧ的培养基上呈蓝色。由转化子中蓝白菌落个数即可计算出ＤＮＡ聚合酶的复制差错率。用这一系统测得ＦＤＤＮＡ耐热聚合酶的复制差错率为１０－５～１０－６。
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| 关 键 词： | PCR，DNA聚合酶，复制精确性，碱基置换突变，移码突变 |
Constuction of an lmproved System for the Determination of Fidelity of Polymerase in PCR |
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