| 热稳定酯酰辅酶A合成酶的异源表达及酶学特性 |
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| 引用本文： | 董爽爽,王衍杰,季俊杰,郑舰艇.热稳定酯酰辅酶A合成酶的异源表达及酶学特性[J].微生物学报,2016,56(9):1477-1485. |
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| 作者姓名： | 董爽爽 王衍杰 季俊杰 郑舰艇 |
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| 作者单位： | 中国科学院过程工程研究所, 生化工程国家重点实验室, 北京 100190;中国科学院大学, 北京 100049,中国科学院过程工程研究所, 生化工程国家重点实验室, 北京 100190,中国科学院过程工程研究所, 生化工程国家重点实验室, 北京 100190,中国科学院过程工程研究所, 生化工程国家重点实验室, 北京 100190 |
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| 基金项目： | 国家“973计划”（2013CB734000）；国家自然科学基金（31370101，31570056），北京市自然科学基金（5144031），青年千人计划和中国科学院启动资金 |
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| 摘 要： | 【目的】为寻找能合成丙酰辅酶A和丁酰辅酶A等聚酮合成前体的生物催化剂,用体外酶学实验对一个酯酰辅酶A合成酶进行了表征。【方法】利用丙二酰辅酶A合成酶作为输入序列,通过BLAST程序在Caldicellulosiruptor owensensis OL的基因组中找到1个酯酰辅酶A合成酶基因。在大肠杆菌中进行了异源表达,并通过亲和层析进行纯化。底物谱、最适反应条件、稳定性和动力学参数通过体外酶学实验进行表征,而定点突变则用于活性中心的氨基酸残基的分析。【结果】该酶具有较好的底物宽泛性,可识别丙酸、丁酸、2-甲基丙酸、戊酸、3-甲基丁酸、2-甲基丁酸以及环己甲酸等一系列单酸。反应最适温度为30°C,最适p H为7.0。70°C保温8 h后仍有45%的活性残留,表明该酶相对比较稳定。通过活性中心3个位点的定点突变可以改变酶的底物特异性。【结论】C.owensensis OL来源的酯酰辅酶A合成酶是潜在的生物催化剂,可以用于聚酮前体的合成。
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| 关 键 词： | 热稳定性 酯酰辅酶A合成酶 底物特异性 酶学性质 定点突变 |
| 收稿时间： | 2015/12/11 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2016/2/25 0:00:00 |
Heterologous expression and characterization of a thermostable acylCoA synthetase |
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| Shuangshuang Dong,Yanjie Wang,Junjie Ji and Jianting Zheng.Heterologous expression and characterization of a thermostable acylCoA synthetase[J].Acta Microbiologica Sinica,2016,56(9):1477-1485. |
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| Authors: | Shuangshuang Dong Yanjie Wang Junjie Ji and Jianting Zheng |
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| Institution: | National Key Laboratory of Biochemical Engineering, Institute of Process Engineering, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100190, China;University of Chinese Academy of Sciences, Beijing 100049, China,National Key Laboratory of Biochemical Engineering, Institute of Process Engineering, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100190, China,National Key Laboratory of Biochemical Engineering, Institute of Process Engineering, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100190, China and National Key Laboratory of Biochemical Engineering, Institute of Process Engineering, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100190, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | thermostability acyl-CoA synthetase substrate specificity biochemical characterization site-directed mutagenesis |
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