NF-κB荧光素酶报告基因系统的构建及验证 |
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引用本文: | 郭志兰,车路阳,李晶哲,孙震晓,刘长振.NF-κB荧光素酶报告基因系统的构建及验证[J].生物工程学报,2016,32(10):1465-1473. |
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作者姓名: | 郭志兰 车路阳 李晶哲 孙震晓 刘长振 |
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作者单位: | 1 北京中医药大学 中药学院,北京 100102;2 中国中医科学院 医学实验中心 北京市重点实验室,北京 100700,3 中国人民解放军总医院骨科,北京 100853,2 中国中医科学院 医学实验中心 北京市重点实验室,北京 100700,1 北京中医药大学 中药学院,北京 100102,2 中国中医科学院 医学实验中心 北京市重点实验室,北京 100700 |
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基金项目: | 国家自然科学基金 (Nos. 31170829,81171762,81550017,81473418),中国中医科学院自主选题项目 (No. zz2015015) 资助。 |
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摘 要: | 为了定量检测NF-κB的活化效果及筛选与NF-κB活化调控相关的药物,通过去除逆转录病毒载体pQCXIP原有的CMV启动子,并分别插入NF-κB增强子序列及荧光素酶NanoLuc报告基因序列,构建了一种新的含有NF-κB增强子序列和NanoLuc(NLuc)报告基因序列的表达载体,并进一步建立受NF-κB调控的稳定表达NLuc荧光素酶的细胞系。酶切鉴定及测序结果表明成功构建了重组质粒pQCXIP-NF-κB-NLuc;NF-κB信号通路的刺激物肿瘤坏死因子TNF-α作用于构建的稳定表达NLuc的细胞系后出现特异性的荧光素酶反应,且该酶反应与TNF-α的刺激呈良好的时间、剂量依赖性,该结果表明受NF-κB调控的稳定表达NLuc荧光素酶的细胞系构建成功。实例验证中,NF-κB抑制剂雷公藤甲素对此细胞系NLuc荧光素酶表达的抑制呈剂量效应。综上,本实验构建的受NF-κB调控的稳定表达NLuc荧光素酶的报告基因系统可用于NF-κB的活化效果的定量检测及筛选与NF-κB活化调控相关的药物,具有研究和应用价值。
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关 键 词: | NF-κB,荧光素酶NanoLuc,报告基因系统 |
收稿时间: | 5/5/2016 12:00:00 AM |
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