含蛋白转导域的SARA/SBD融合蛋白的原核表达、纯化及生物学活性鉴定 |
| |
引用本文: | 李曼,黄晨,张伟,王增禄,李晶,杜锐,孙世仁,张鹏,张英起.含蛋白转导域的SARA/SBD融合蛋白的原核表达、纯化及生物学活性鉴定[J].生物技术通讯,2011,22(2):158-162. |
| |
作者姓名: | 李曼 黄晨 张伟 王增禄 李晶 杜锐 孙世仁 张鹏 张英起 |
| |
作者单位: | 1. 第四军医大学西京医院肾脏内科,西安,710032 2. 第四军医大学药学系生物制药学教研室,西安,710032 |
| |
摘 要: | 目的:SARA/SBD是纤维化形成过程中的负性调节因子。原核表达、纯化含反式激活蛋白(TAT)蛋白转导域(PTD)的TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,并鉴定其生物学活性。方法:将TAT PTD-SARA/SBD基因克隆入带His标签的原核表达载体pET-44a(+)中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达产物经Ni2+-NTA亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE和Western印迹鉴定目的蛋白;用人腹膜间皮细胞系(HPMC),通过免疫细胞化学方法检测其穿膜能力,及与TGF-β1信号通路中Smad2因子的共定位情况。结果:用基因工程方法表达和纯化了TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,目的蛋白约占菌体总蛋白的20%左右,且以可溶形式表达,经Ni2+-NTA纯化后,所获蛋白纯度高于95%(HPLC归一法);功能学实验结果显示该蛋白能穿过胞膜,主要定位于胞核,且与Smad2因子具有核内共定位。结论:表达了TAT PTD-SARA/SBD融合蛋白,该蛋白具有生物学活性。
|
关 键 词: | 蛋白转导域 SARA/SBD融合蛋白 原核表达 纯化 生物学活性 |
本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录! |
|