一种简单高效的酵母单菌落 PCR 方法 |
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引用本文: | 陈忠翔,房志家,陈婷,赵敏,黄志伟.一种简单高效的酵母单菌落 PCR 方法[J].生物技术通讯,2013,0(2):225-229. |
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作者姓名: | 陈忠翔 房志家 陈婷 赵敏 黄志伟 |
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作者单位: | 东华大学 化学化工与生物工程学院,上海 201620 |
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摘 要: | 目的:为快速简便地挑选出酿酒酵母重组克隆,探索建立一种经济、直接、高效的酵母单菌落 PCR 方法.方法:以 Leu2MX6基同重组或重组质粒转化得到的酵母突变菌为材料,分别采用传统的提取基组或质粒的方法、煮沸法及化学试剂处理法等制备 PCR 模板进行重组克隆鉴定,并对6种 PCR 模板制备方法的效果进行比较与分析;对加热提取法进行优化并进行重组子的提取和验证.结果与结论:直接以1 mm2单克隆菌株95℃处理5 min 后的酵母菌落水悬浮液为模板进行单菌落 PCR,是一种简单高效的酵母重组克隆鉴定方法.该方法能弥补传统方法的不足,且简便快速、结果稳定,可作为筛选和鉴定阳性克隆的有效手段.同时,这种单菌落 PCR 法也可应用重组毕赤酵母的阳性克隆筛选.
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关 键 词: | 酵母 菌落 PCR 重组克隆 筛选 |
A Simple and Effective Method for Yeast Colony PCR |
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Abstract: | |
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Keywords: | yeast colony PCR recombinant clone screening |
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