| G蛋白Rab3a协同神经生长抑制因子(GIF)抑制神经元的生长 |
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| 作者姓名： | 陈巧林 康巧华 任宏伟 王宗元 茹炳根 |
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| 作者单位： | 1. 北京大学人民医院风湿免疫科
2. 北京大学生命科学学院生物化学与分子生物学系,蛋白质工程国家重点实验室,北京,100871
3. 扬州大学畜牧兽医学院,扬州,225009 |
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| 基金项目： | 国家 95攻关合同项目资助,批准号 :96 C0 2 0 1 0 9~~ |
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| 摘 要： | 为了研究G蛋白Rab3a与神经生长抑制因子 (growthinhibitoryfactor,GIF ,原称金属硫蛋白 3,MT 3)相互作用对神经元细胞生长的影响 ,以嗜铬细胞瘤株 (pheochromocytoma)PC1 2充当神经元模型 .将hMT 3(humanMT 3)和Rab3a基因分别克隆至真核表达载体pFlag CMV 2和pSV HA中 ,质粒共同转染PC1 2细胞 ,观察转染后细胞的生长状态 .以共转染pFlag CMV 2 hMT 1和pSV HA Rab3a的细胞组作为对照 ,验证hMT 3与Rab3a相互作用对PC1 2影响的特异性 .结果发现 ,共转染pFlag CMV 2 hMT 3和pSV HA Rab3a的PC1 2细胞生长明显受到抑制 ,细胞生长抑制率与GIF在脑提取物存在F的神经元生长抑制作用接近 ,但转染两基因中的任何单个基因以及共转染pFlag CMV 2 hMT 1和pSV HA Rab3a对PC1 2细胞生长无影响 .进一步构建重组表达质粒pGEX 4T 1 Rab3a和pGEX 4T 1 hMT 3,转化大肠杆菌BL2 1 ,经谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析、凝血酶酶切和SephacrylS 1 0 0纯化 ,得到纯度 95 %以上的Rab3a和hMT 3蛋白 .体外细胞生物学活性检测表明 ,表达的Rab3a蛋白与重组hMT 3蛋白共培养PC1 2 ,对细胞的生长产生了明显的特异性协同抑制作用 ,抑制曲线与GIF在脑提取物存在下的神经元生长抑制曲线极为相似
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| 关 键 词： | Rab3a 神经生长抑制因子 神经元 转染 抑制 |
| 收稿时间： | 2004-08-20 |
| 修稿时间： | 2003-09-18 |
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