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| 嗜热厌氧乙醇杆菌调控因子PadhE-1的分离、重组表达及其与adhE基因启动子的结合 | |
| 引用本文： | 裴建军?,周庆?,曲威,邵蔚蓝.嗜热厌氧乙醇杆菌调控因子PadhE-1的分离、重组表达及其与adhE基因启动子的结合[J].微生物学通报,2010,37(10):1501-1505. |
| 作者姓名： | 裴建军? 周庆? 曲威 邵蔚蓝 |
| 作者单位： | 1. 江南大学生物工程学院,江苏无锡,214122 2. 南京师范大学生命科学学院,江苏南京,210046 3. 江南大学生物工程学院,江苏无锡214122;南京师范大学生命科学学院,江苏南京210046 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No. 30900008); 江苏省高校自然科学重点项目(No. 09KJA180003) |
| 摘 要： | 嗜热厌氧乙醇杆菌发酵是生产纤维素乙醇的有效途径,而嗜热厌氧乙醇杆菌醛/醇脱氢酶(AdhE)是其乙醇代谢途径中的关键酶。以adhE启动子区域的DNA序列(TRRadhE)作为诱饵,通过制备核酸亲和层析柱,利用调控因子与DNA特异性结合的特点,得到调控因子PadhE-1。经过蛋白测序和NCBI数据库的比对,发现其N端序列与Thermoanaerobacter pseudethanolicus39E的LacI家族转录调控因子(GenBank accession No.YP_001665770)有90%的同源性。根据同源性设计引物,从嗜热厌氧乙醇杆菌JW200基因组中通过PCR扩增得到调控因子PadhE-1的基因,并克隆到表达载体pET-28a得到重组质粒pET-PadhE。转化大肠杆菌JM109(DE3),经IPTG诱导表达,Ni2+亲和柱纯化,得到重组表达的调控因子PadhE-1。体外凝胶阻滞实验证实PadhE-1能与TRRadhE特异性结合。这将有助于我们了解嗜热厌氧乙醇杆菌的乙醇代谢调控机理。 |
| 关 键 词： | 嗜热乙醇杆菌JW200 亲和层析 调控因子 凝胶阻滞 |
Expression and Identification of the PadhE-1 from Thermoanaerobacter ethanolicus JW200 and Its Binding with adhE Promoter in vitro |
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| PEI Jian-Jun?,ZHOU Qing?,QU Wei and SHAO Wei-Lan.Expression and Identification of the PadhE-1 from Thermoanaerobacter ethanolicus JW200 and Its Binding with adhE Promoter in vitro[J].Microbiology,2010,37(10):1501-1505. | |
| Authors: | PEI Jian-Jun? ZHOU Qing? QU Wei and SHAO Wei-Lan |
| Institution: | 1. School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China;2. College of Life Sciences, Nanjing Normal University, Nanjing, Jiangsu 210046, China;2. College of Life Sciences, Nanjing Normal University, Nanjing, Jiangsu 210046, China;1. School of Biotechnology, Jiangnan University, Wuxi, Jiangsu 214122, China; 2. College of Life Sciences, Nanjing Normal University, Nanjing, Jiangsu 210046, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | Thermoanaerobacter ethanolicus JW200 Regulator Affinity chromatography Electrophoretic mobility shift assay |
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