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| NF-κB决定小鼠胎肝激酶-1基因启动子的基本活性 | |
| 作者姓名： | 郑丽端 童强松 杨渝珍 侯晓华 杨秀萍 董继华 |
| 作者单位： | 1. 华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科,武汉,430022 2. 华中科技大学同济医学院附属协和医院外科,武汉,430022 3. 华中科技大学同济医学院生物化学与分子生物学教研室,武汉,430030 4. 华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科,武汉,430022 5. 华中科技大学同济医学院附属协和医院中心实验室,武汉,430022 |
| 摘 要： | 为克隆小鼠胎肝激酶-1（fetal liver kinase-1，FLK-1）基因上游启动子序列，并观察其不同截短片段在小鼠血管内皮细胞中的启动子活性，以小鼠全基因组为模板，通过PCR扩增方法获得-258～+299 bp、-96～+299 bp、-71～+299 bp、-36～+299 bp大小的FLK-1启动子片段，将其定向克隆入pGL3 Basic，构建荧光素酶报告基因载体，并制备NF -κB结合位点的突变或缺失体.在阳离子脂质体介导下，报告基因载体瞬时转染小鼠血管内皮细胞株SVEC 4-10.结果发现，在小鼠血管内皮细胞中，各FLK-1启动子片段均有活性；－71～－36 bp区存在FLK-1启动子的核心调控元件.针对该区域NF-κB结合位点进行突变或缺失，能导致启动子活性显著降低；凝胶电泳迁移率实验表明该区段能结合转录因子NF-κB.结果提示，成功克隆了在血管内皮细胞中具有活性的FLK-1上游启动子序列，NF-κB是决定其基本活性的重要转录因子，为进一步研究FLK-1基因的转录调控机制奠定了基础. |
| 关 键 词： | 胎肝激酶 1 血管内皮细胞 启动子 报告基因. |
| 收稿时间： | 2007-01-03 |
| 修稿时间： | 2007-01-03 |
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